Лекции по фитопатологии учебное пособие для аспирантов сельскохозяйственного направления

5. Диагностика бактериальных болезней. Для диагностики бактерио-
зов используют следующие методы. 
• 
Визуальныйанализ симптомов. Точно определить заболевание на ос-
новании симптомов можно лишь в редких случаях, когда симптомы носят 
специфический характер. На бактериальную природу некрозов часто указы-
вает наличие экссудата. Для стимулирования его проявления пораженные ча-
сти растений помещают во влажную камеру. 
• 
Микроскопический с использованием окрашивания. Микроскопиче-
ский препарат готовят из пораженной ткани растения, для чего используют 

---

39 
пограничные участки между пораженной и здоровой тканью. Проведение 
окрашивания (например, по Граму) облегчает распознавание бактериальных 
клеток в ткани растения-хозяина. 
• 
Микробиологический. Заключается в изоляции возбудителя из пораженных 
тканей на искусственные питательные среды. При этом необходимо установить 
патогенность изолятов бактерий, то есть их способность вызывать на искусствен-
но инфицированных растениях те же симптомы, какие были на исследуемом рас-
тении при естественном поражении. При этом действуют в соответствии с прави-
лом Роберта Коха, названным триадой Коха. Метод включает три основных этапа: 
выделение возбудителя, заражение растения и снова выделение возбудителя. 
• 
Серологический. Сущность метода такая же, как при диагностике ви-
русов. Сложность серологической диагностики бактерий состоит в том, что у 
бактериальной клетки имеются белки, не только специфичные для вида, но и 
общие для рода и семейства бактерий. Поэтому для получения специфичной 
антисыворотки используют лишь видоспецифичные белки (антигены). 
Наиболее часто применяют такие серологические методы, как иммунофер-
ментный анализ и реакцию иммунофлуоресценции. 
• 
Молекулярный. Среди нескольких диагностических методов, в которых 
используется полиморфизм молекулы ДНК бактерий, наиболее распространен 
метод амплификации (умножения) видоспецифичных последовательностей 
ДНК при полимеразной цепной реакции (ПЦР). В ходе этой реакции фрагмен-
ты ДНК, характерные только для одного вида бактерии, избирательно синте-
зируются ферментом полимеразой до количества, в тысячи и миллионы раз 
превышающего исходное число копий выбранного фрагмента ДНК. Далее 
фрагмент обнаруживают с помощью электрофореза в агарозном геле или по 
флуоресценции исходного раствора. Метод отличается высокой чувствитель-
ностью (теоретически достаточно 1 копии бактериальной ДНК), быстротой (до 
2...3 ч), высокой надежностью. К недостаткам метода относят высокую стои-
мость реактивов и оборудования для проведения ПЦР, а также необходимость 
предварительного изучения разнообразия ДНК фитопатогенных бактерий.