Mavzu: oqsillarning gel-elektroforezi

OQSILLARNING GEL-ELEKTROFOREZI
Asboblar, reaktivlar: elektroforez asbobi, mikropipetka, shprits, shisha naycha uchun shtativ, fotopolimerlash uchun lampa, elektr toki manbai, biriktiruvchi simlar , tris, akrilamid, TEMED, HCI, BIS, riboflavin, saxaroza, ammoniy persulfat, glitsin yoki (alanin), bromfenol qumi (metilen yashili), toza sirka qaxrabosi, (KOH).
Eritma tayyorlash. Gel tayoyrlash uchun asosiy eritmalar.
Nordon oqsillar uchun. A) ishqoriy eritma(pH=8.9):

1. 
   48,0 ml I N HCI;
   
2. 
   36,6 g tris;
   
3. 
   0,23 ml TEMED 100ml gacha distillangan suv bilan keltiriladi.
   
4. 
   48.0 ml I N HCI;
   
5. 
   5,98 g tris;
   
6. 
   0,46 ml TEMED 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   
7. 
   28.0 g akrilamid; 8.0,75 g BIS; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   

9. 10 g akrilamid; 10.2,6 g BIS; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.

11. 
    400 mg riboflavin 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
    
12. 
    40 g saxaroza; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
    
13. 
    0,14 g ammoniy persulfat; 100 ml gacha distillangan suv solinadi. 14. 6.0 g tris; 15.28,8g glitsin 1000 ml gacha distillangan suv solinadi. Ishlatishdan avval 10 marta suyultirilishi lozim!
    

Indikator — bo’yovchi eritma; 0.001 g bromfenol ko’ki; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
Fiksirlovchi — bo’yovchi eritma; 1 g maid qorasi 10 V; 100 ml gacha 7%sirka qahrabosi solinadi.
Ajratuvchi — quyultiruvchi eritma; 1000 ml 7% sirka qahrobosi
Ishqoriy oqsillar uchun A nordon eritma(pH=4.3); 5,8 ml 1N KOH; 17,2 ml toza sirka qahrobosi; 4.0 ml TEMED; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.

2. 
   nordon eritma(pH=7,8): 48.0 ml 1N KON; 2,87 ml toza sirka qahrobosi; 0,48 ml TEMED; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   
3. 
   nordon eritma: 60 g akrilamid; 0,4 g BIS; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   

5. 
   nordon eritma: 4 mg riboflavin; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   
6. 
   nordon eritma 40 g saxaroza; 100 ml gacha distillangan suv solinadi.
   

K) nordon eritma: 0,28 g ammoniy persulfat; 100ml gacha distillangan suv solinadi.
Elektrod buferi eritmasi(pH=4,5;) 31,2 gr –alanin; 8,0 ml toza sirka; 1000 mlgacha distillangan suv solinadi.
Ishlatishdan avval 10 marta suyultirilishi lozim!
Indikator — bo’yovchilari: 0,1g metilen yashili;100 ml gacha distillangan suv solinadi.
Ajratuvchi- quyultiruvchi eritma va fiksirlovchi — bo’yovchi eritmalar ishqoriy oqsillar uchun berilganidek qilib tayyorlanadi. «K» eritmadan tashqari barcha eritmalarni muzlatkichda saqlash mumkin. «K» eritma bevosita ishlatishdan oldin tayyorlanadi.