Методика проведения лабораторных анализов в свп, их клинико-диагностическое значение

Специальное оборудование. Фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.
Ход определения. В пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови (разведение в 251 раз). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. Экстинкцию измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) или спектрофотометре при длине волны 540-545 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (5,02 мл трансформирующий раствор). При тех же условиях измеряют стандартный раствор.
Расчет содержания гемоглобина производят по формуле:
Hb (г%) = Е_оп/Е_ст ∙ С ∙ К ∙ 0,001,
где Е_оп – экстинкция опытной пробы; Е_ст – экстинкция стандартного раствора; С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, мг%; К – коэффициент разведения крови; 0,001 – коэффициент для пересчета мг/100 мл в г/100 мл.
При расчете можно использовать калибровочный график, построенный по стандартному раствору гемиглобинцианида. При этом при определении не обязательно использование стандартного раствора (хотя время от времени лучше поставить контрольную пробу с известной концентрацией с целью контроля хода определения). Для построения калибровочного графика нужно использовать следующую схему подготовки растворов:

№ пробирки	Стандартный раствор, мл	Трансформирующий раствор, мл	Содержание гемоглобина в крови, г%
1	-	6	Холостая
2	2	4	5
3	4	2	10
4	6	-	15

Измеряют против «холостой» пробы (№ пробирки 1).