Microsoft Word Введение в спектральный и люм анализ doc

разделить на следующие группы: нук-
леиновые кислоты, белки, коферменты, 
продукты окисления и витамины [1]. 
Спектры поглощения нуклеино-
вых кислот определяются входящими 
в их состав пуриновыми и пиримиди-
новыми основаниями. Люминесценция 
нуклеиновых кислот в водных раство-
рах очень слаба: квантовый выход лю-
минесценции ДНК, например, состав-
ляет около 10 
– 4
, а положение максимума флуоресценции 330 – 335 нм. 
Из аминокислот способны люминесцировать только три ароматических 
аминокислоты: триптофан, тирозин и фенилаланин, максимумы флуоресцен-
Рис. 12 . Спектры ультрафиоле-
товой флуоресценции мышеч-
ных волокон (1), нейронов (2), 
эритроцитов (3). 
нм 

---

31 
ции которых в водных растворах приходятся на 348, 303 и 282 нм, а квантовые 
выходы равны 0,2; 0,21 и 0,04 соответственно. Поэтому собственная люминес-
ценция белков лежит в УФ области спектра и полностью определяется люми-
несценцией этих трех аминокислот, при этом основной вклад в люминесцен-
цию белков принадлежит триптофану, а в его отсутствие – тирозину, и только 
в отсутствие их обоих проявляется слабая люминесценция фенилаланина.
В клетках человека и животных содержится много белков, в состав кото-
рых входят триптофан, тирозин и фенилаланин. Это актин, миозин, ферменты 
типа дегидрогеназ, фосфатаз, оксидаз, некоторые гормоны, ферменты пищева-
рительной системы, альбумины и глобулины плазмы крови, и другие вещества. 
Собственная ультрафиолетовая флуоресценция всех этих белков определяется, 
главным образом, триптофаном
3
, что и определяет схожесть спектров люми-
несценции многих белков и клеток (см. Рис.12). 
В видимой области спектра люминесцируют различные продукты окис-
ления белков и липидов (синяя область спектра с максимумом около 405 нм).  
Флуоресценция живых тканей в синей и желто-зеленой областях связана с 
наличием в клетках восстановленной формы пиридиннуклеотидов (НАД·Н и 
НАДФ·Н) и окисленной формы флавопротеинов (ФП). Эти вещества участвуют 
в таких процессах, как гликолиз, пентозный цикл, цикл Кребса, окисление 
жирных кислот и, что особенно важно, клеточное дыхание. Поэтому практиче-
ски любые сдвиги в клеточном метаболизме отражаются и на динамике флуо-
ресценции НАД•Н и ФП, что может быть выявлено при люминесцентном ана-
лизе живых тканей. 
3
) Очень важным свойством люминесценции триптофана является смещение макси-
мума его флуоресценции при изменении полярности и жесткости его микроокружения, что 
позволило разработать флуоресцентный метод анализа структурного состояния натив-
ных триптофансодержащих белков как в растворе, так и в составе клетки. Конформацион-
но- чувствительными оказались и другие параметры флуоресценции этих белков: квантовый 
выход, длительность флуоресценции и степень поляризации. 

---

32 
Восстановленная форма никотинамидадениндинуклеотида (НАД•Н) об-
ладает характерным спектром поглощения, включающим две полосы поглоще-
ния в ультрафиолетовой части спектра с максимумом в области 260 нм и 340 нм, 
а также собственной синей флуоресценцией с максимумом в интервале 465—
480 нм. Переход НАД•Н в окисленное состояние сопровождается потерей одной 
полосы (при λ=340 нм) в спектре поглощения и утратой способности флуорес-
цировать.