Microsoft Word Введение в спектральный и люм анализ doc

Спектры люминесценции очень чувствительны к химическим свойствам 
окружения (полярности, pH, концентрации, вязкости и др.) люминесцирующей 
молекулы, что широко используются в биохимических исследованиях. Люми-
несценция позволяет изучать изменения конформации макромолекул, а при ис-
пользовании люминесцентного микроскопа изучать и локализацию люминес-
цирующих молекул внутри клетки.
Укажем здесь лишь два основных закона люминесценции: 
1. Закон Стокса: Спектр люминесценции вещества всегда смещен в 
область более длинных волн относительно его спектра поглощения (см., 
например, спектры на Рис.10). 
2. Закон Вавилова: Квантовый выход и спектр люминесценции слож-
ных молекул не зависят от длины волны возбуждения. Основное требование 
к спектральному диапазону волн, используемому для возбуждения люминес-
ценции: -  он должен попадать внутрь полосы поглощения этого вещества. 
Оба эти закона объясняются наличием внутренней конверсии в сложных 
молекулах, в результате которой испускание всегда происходит с самых нижних 
подуровней возбужденных электронных состояний на все подуровни основного 
состояния, независимо от того, на какие колебательно- вращательные поду-
ровни верхних электронных состояний была возбуждена молекула (см. Рис.9). 
5.2. Собственная люминесценция биомолекул 
(для ознакомительного чтения). 
При облучении различных клеток позвоночных и беспозвоночных жи-
вотных, а также растений и микроорганизмов коротковолновым ультрафиоле-
том (λ=250–280нм), можно зарегистрировать их флуоресценцию. Это свечение 

---

30 
объясняется тем, что многие ткани организма содержат вещества (витамины, 
белки и др.), способные флуоресцировать под действием света. Такая флуо-
ресценция биомолекул называется собственной. Собственная ультрафиоле-
товая флуоресценция живых тканей определяется, главным образом, свече-
нием белков. Спектры собственной ультрафиолетовой флуоресценции многих 
клеток имеют сходную форму, хотя одни из них светятся сильнее, другие – сла-
бее (рис.12). 
Вместе с тем разные ультраструктурные компоненты одной и той же клетки 
флуоресцируют неодинаково. Наиболее яркая ультрафиолетовая флуоресценция 
присуща сократительному аппарату клетки, митохондриям и ядрышкам. 
В состав клеток животного происхождения входит ряд веществ, люминес-
цирующих как в ультрафиолетовой, так 
и в видимой области спектра. По поло-
жению спектров люминесценции био-
молекул в шкале длин волн их можно