Накане усули билан конъюгат олиш. Ишнинг мақсади

Реактив ва жиҳозлар: Конъюгата антрацен, корамол зардоби альбумин, гидроксида натрия, уксус кислотаси, ацетона, нитрит натрия,лиофил куритиш ускунаси, бромуксус кислотаси, лофил қуритиш ускунаси (Расм№10).
Ускуналар ва материаллар: Лиофил куритиш ускунаси.



10-расм. Лиофил куритиш ускунаси.
Бу ҳолда оқсиллар таркибига қўшимча гидрофил гуруҳлар киритилади, бу ҳам конфликтларнинг эрувчанлигини оширишга ёрдам беради. Тавсия этилган тўсувчи бирикмалардан фойдаланиш эрувчан фракциянинг ҳосилдорлигини 15% дан 95% гача ошириш имконини беради.
Лаборатория ишини бажариш тартиби.
0,1 н натрий гидроксиднинг 1 мл 0,1 г (1.5 мкм) БСА оқсил эритмасига антрацен (АЦ)-қорамол алъбумин зардобини (БСА) конъюгатини олиш учун 1,5 мл пиридин аралаштириб, совутилган ҳолда томчи қўшилади ва сўнгра 16 мг 9-антрасеналдегид (АЦА) қўшилади. 25 градус температурада уч соат аралаштирилгандан сўнг 50 мг (0.7 мм) акриламид (АА) нинг блокировкали бирикмасини ва 10 мл сувда 1 мг натрий бороҳидиднинг камайтирувчи агенти эритмасини қўшилади. 30 дақиқадан сўнг 4 томчи музлик сирка кислота қўшиб ва оқсилни 8 мл ацетонга чўктирилади, 15 минутдан сўнг чўкма сентрифугаланади ва 5 мл ацетон билан 8 марта ювилади. Чўкмани вакум остида қуритгандан сўнг 5 мл 0,01 н натрий гидроксидда эритилганда эримайдиган фракциянинг 10% дан кам берадиган конъюгат олинади.
Конъюгат икки йўл билан олинади:

1. 
   Азид конъюгация усули ёрдамида ишлаб чиқариш. Ишлаб чиқариш усули технологик жараённинг асосий босқичларидан иборат: карбамид иштирокида оксидланиш, алкилланиш, гидразинолиз ва азид конюгацияси.
   

Поли-1,4-этиленпиперазинни оксидлаш кислотали муҳитда водород пероксид билан карбамид иштирокида 45-55°C ҳароратда 12-24 соат давомида сув ўтказувчан реакторда олиб борилади. Сўнгра реакция аралашмаси суюлтирилади, 0.45 нм диафильтрацию еки ультрафильтрация билан жиҳозланган махсус фильтр устида сузилади, диафилтрация 5 кда заррача ажратиш қуйи чегараси эга касеталар билан ултрофильтрация бирлиги амалга оширилади ва 0.22 нм ҳажми билан бир фильтри элемент билан жиҳозланган бир заправка филтри филтри устида сузилади. Кейин музлатилади-қуритилади, НХ талабларига риоя қилиш учун таҳлил қилинади ва омборга топширилади.

2. 
   Карбодиимид конюгация усули ёрдамида Лонгидазани ишлаб чиқариш усули. Кетма-кет ишлаб чиқариш технологияси технологик жараённинг асосий босқичларидан иборат: алкрилл, карбомид усули билан карбамид иштирокида оксидлаш ва конъюгация олиш. Оғирлик нисбатида 40-95°C температурада сувли муҳитда бромоацетик кислота билан алкилланган полиефир-1,4-этилен пиперазиндан белгиланган хоссаларга эга (юкорига қаранг) фойдаланинг(85:15)-(70:30) шунга кўра. Аралашма 50-70°C ҳароратда 3 соат давомида аралаштирилади, сўнгра реакция массасига карбамид, сирка кислота ва водород пероксид қўшилади, сўнгра узлуксиз аралаштириб турган ҳолда 18-22 соатга қолдирилади. Реакция массаси 0.45 нм поре ўлчамига эга фильтр элементи билан жиҳозланган патрон фильтрида фильтрланади, полимер 5 кда заррача кам чегараси бўлган ултрафильтрлаш бирлигида ювиш орқали тозаланади водород пероксид таркибига 0.001% дан кўп бўлмаган (водород пероксид учун синов) ажралиб чиқади. Эритма 10-15% га концентрланган, полимердаги карбоксил гуруҳлар таркибида камида 6% бўлиши керак. Гиалуронидазанинг ҳисобланган миқдори аралаштириш вақтида реакцион муҳитга киритилади ва муҳитнинг PH қиймати 4.8 га тенг қилинади. Аралаштиришни давом эттириб, сувда эрувчан карбодиимид қўшилади, шунда унинг миқдори АОК қилинган гиалуронидазанинг 25-50% ни ташкил этади (оқсил жиҳатидан). Реакцион аралашма 1-1 учун 0-25°C ҳароратда сақланади. 5 соатдан кейин конюгация даражаси кузатилади, бу 95% дан паст бўлмаслиги керак. Агар натижа мусбат бўлса, реакцион аралашма тозаланган сув билан ювилади, 6.8-7.0 PH қийматига ишқорланади ва АР-15 маркали чуқурлик фильтри билан жиҳозланган дискли фильтрда фильтрланади. Олдиндан филтрациядан сўнг реакцион аралашмани Пелликон кассетасида тозаланган сув билан ювиш орқали тозалаш давом этмоқда, шунда сувнинг умумий миқдори 1 кг қуруқ моддага камида 200 литр бўлади. Сўнгра Лонгидаза фаоллигига эга бўлган модда эритмаси концентрланган, стерил 0,22 нм ли фильтр пардаси билан жиҳозланган патрон фильтрига фильтрланади ва суюқ модда сифатида шишаларга қадоқланади. Бундан ташқари, олинган стерил концентратни музлатиш мумкин. "Лонгидаза" препарати мавжуд бўлган модда олишда қуруқ шаклда бўлади. Солиқ кодекси талабларига риоя этилиши устидан назоратни амалга ошириш ва тайёр маҳсулотни омборга топширади. Алкиллаш, оксидланиш босқичларини ўз ичига олган, лекин карбомид усули ва тозалаш усуллари билан карбамид, конъюгация қўшилмасдан таклиф этилган ишлаб чиқариш усули Лонгидаза намунасини олди. Худди азид конъюгация усули ёрдамида лонгидаза ишлаб чиқариш усулидаги каби карбамид қўшилиши ферментатив фаолликни, конъюгация даражасини ва мақсадли маҳсулот ҳосил бўлишини ҳамда конъюгациянинг барқарорлигини оширади.