Накане усули билан конъюгат олиш. Ишнинг мақсади

МАВЗУ: НАКАНЕ УСУЛИ БИЛАН КОНЪЮГАТ ОЛИШ.
Ишнинг мақсади: Гептан оқсил таркибли конъюгатни иммун тахлили антитана учун ишқорли мухитда олиш усули.
Ишнинг асосий вазифалари:

1. 
   Иммунофермент усуллари ўзлаштириш орқали иммунофермент конъюгатларни назорат қилиш;
   
2. 
   Тавсия этилган усулдан яна бири энг яқин бўлган фермент-оқсил конюгатларини олиш;
   
3. 
   Азид конъюгация усули ёрдамида ишлаб чиқариш ва карбомид конюгация усули ёрдамида Лонгидазани ишлаб чиқаришни ташкил этиш;
   

Ишнинг назарий асослари:
а. Иммунофермент конъюгатларни сифат курсаткичи фермент хусусиятларини яъни канъюгант таркибидаги антитана ва антигенлар миқдори асосида канъюгат таёрлаш усуллари.
б. Фермент-оқсил конюгатларини олиш учун Накан усули.
Ишнинг қисқача назарияси. Биокимё сохасида иммун тахлил учун антитана олишга мулжалланган ихтиро хисобланади. Иммунофермент усуллари ўзлаштириш орқали иммунофермент конъюгатларни назорат қилиш мумкин. Иммунофермент конъюгатларни сифат курсаткичи фермент хусусиятларини яъни канъюгант таркибидаги антитана ва антигенлар миқдорини кайсики булар асосида канъюгат таёрланади. Сезувчанлик ва ишлаб чиқариш хусусияти ИФА да тўғридан тўғри тўқимадан олинган фермент сифатига боғлик бўлади.
Тавсия этилган усулдан яна бири энг яқин бўлган фермент-оқсил конюгатларини олиш учун Накан усули бўлиб, у қуйидагилардан иборат:
Конюгат олиш учун pH мухити 8.8-9.5 да ташувчи оқсил эритмасига фаол алдегид гуруҳларига эга бўлган гептан эритмаси қўшилади. 1-3 соатдан кейин оқсил гуруҳлари ва гептан алдегид гуруҳи ўртасида ковалент азометин боғлари вужудга келади. Натижада фермент-оқсил конюгатлари хосил бўлади. Бундай конъюугатларни қуритишда ёки эритмаларини сақлашда ачитқи алъбуминлар (20 г/л гача), мертиолат (0.02%), глицерин (50%) ёки меркаптоэтанол (0.1%) каби қўшимча стабилизаторларнинг сезиларли миқдорда қўшилмасдан, молекулалараро дисулъфид боғлар ҳосил бўлиши билан тиол гуруҳларининг оксидланиши туфайли эримайдиган полимер маҳсулотлар ҳосил бўлади. Бу эрувчан фракциянинг ҳосилдорлигини сезиларли даражада камайтиради ёки конюугатни иммуноанализда ишлатишнинг қўлланилиши камаяди. Бу камчиликлар айниқса полициклик ароматик углеводородлар каби гидрофоб кимёвий бирикмалар бўлган ҳолларда яққол намоён бўлади. Даъво ихтиро қуйидаги муаммони ҳал қилишга қаратилган - полимер маҳсулотлар минимал миқдорда ўз ичига олган юқори эрувчан гептан-оқсил конъюугатлар олиш ва махсус стабилизатор ҳолда барқарор хисобланади.
Гептан-оқсил конъюугатлар олишда бу муаммони ҳал қилиш учун гептан ва ташувчи оқсилнинг ишқорий эритмада биргаликдаги реакциясини ўтказиш ва натрий борогидридни қўшиб, реакцион эритмада конъюгугатни тиклаш учун усул таклиф этилади. Бу ҳолда ёдоацетик кислота ҳосилалари, акрил кислота ҳосилалари, гетероциклик бирикмаларнинг тўйинмаган ҳосилалари, циклик аминлар ва окциранлар гуруҳидан олинган бирикмадан тўсувчи восита сифатида фойдаланиш таклиф этилади.
Бундай иодуксусной ёки акриловой кислоталарнинг ҳосилалари (йодацетамид, йодацетат натрия или акрилонитрил, акриламид, акрилат натрия, метилакрилат), йодуксуслик бирикмалар ҳосилалари (Н-винилпиролпирин, 4-винилпирид, этилен ва оксиленир (этилен), этилен ва оксилпирин) оксид, оқсилнинг тўсувчи бирикмага моляр нисбати билан мос равишда 1: 100 дан 1: 1000 гача. Тўсувчи бирикма консентрациясининг қуйи чегараси оқсил молекуласидаги тиол гуруҳлари сонига боғлиқ бўлиб, консентрациянинг юқори чегараси унинг эрувчанлигини чеклашга боғлиқ.