Polisaxaridlar olish mavzusidagi bitiruv malakaviy ish

2.3. INULAZA FERMENTI FAOLLIGINI ANIQLASH Mazkur usul O'zR FA mikrobiologiya Instituti "Mikroorganizmlar fermentlari" laboratoriyasi xodimlari tomonidan yaratilgan. Usul bakteriya va achitqilar kultural suyuqligida hosil bo'lgan inulaza faolligini aniqlash imkonini beradi. Kerakli reaktivlar va asbob-uskunalar: inulin eritmasi, suv hammomi, rezortsin reaktivi, xlorid kislota, etil spirti aralashmasi, probirkalar, pipetkalar va kolbalar. 
Ishni bajarilishi: tajribani amalga oshirish uchun substrat - 1 % li inulin eritmasi tayyorlanadi. Eritmani tayyorlashda aralashma 100oC haroratli suv hammomida eritma shaffof holga kelguncha saqlanadi (inulin issiq suvda yaxshi eriydi). So'ngra eritma sovitiladi. 3 ml hajmdagi sovitilgan inulin eritmasiga inulaza faolligiga ega kultural suyuqlikdan 1 ml quyiladi. Aralashma aralashtirilgach 30-32oC haroratda 10 daqiqa davomida inkubatsiyalanadi. Hosil bo'lgan erkin fruktoza rezortsin reaktivi bilan aniqlanadi. Ushbu usulda xlorid kislotasining 30 % li eritmasi ishlatiladi. Bunday yuqori kislotalilik va harorat inulinni to'liq kimyoviy parchalaydi. Natijada esa noto'g'ri natija olish mumkin. Buning oldini olish uchun fermentatsiya jarayonidan so'ng reaktsion muhitdan gidrolizlanmagan inulinni chiqarish lozim. Gidrolizat va substrat aralashmasi fermentatsiya jarayonidan so'ng qaynoq bilan ishlov beriladi. Bunda quyi molekulyar fruktozidlar va erkin fruktoza spirtda eriydi, inulin esa spirtda erimaganligi sababli cho'kmaga tushadi. Fruktozanlar miqdori esa o'z navbatida rezortsin reaktivi bilan suvli va spirtli eritmalarda aniqlanadi. Ferment faolligini aniqlashda olingan inulin miqdorini va hosil bo'lgan fruktoza miqdorini bilgan holda inulaza faolligini hisoblash mumkin. Inulaza faolligining 1 birligi sifatida optimal sharoitlarda (t=32oC; pH=5,5-5,8; 10 daqiqa) 1 daqiqa ichida inulindan hosil bo'lgan 180 mkg fruktoza miqdorini qabul qilish mumkin. Fruktoza miqdorini esa rezortsin reaktivi bilan kalibrovka chizig'idan topiladi. 
2.4. ALKILFRUKTOZIDLARNI YUPQA QAVATLI