Q. D. Davranov, B. S. Aliqulov nanobiotexnologiya
komponentlar aralashmasidan, 4-5 soat orasida birgina DNK
Download 7.32 Mb. Pdf ko'rish
|
komponentlar aralashmasidan, 4-5 soat orasida birgina DNK
molekulasidan trillionlab nusxa olish mumkin? Polimeraza -zanjirli reaksiya bir-biriga o‘xshagan ko‘plab sikllar (qaytarishlar) ko‘rinishida o'tadi. Har bir sikl 3 bosqichda o ‘tadi (45-rasm). 1-bosqich. DNK ni denaturatsiyasi (qo‘sh bogii spiralni, alohida polinukleotidlar zanjirlariga ajralishi). Bu jarayon 93-95 °C da 30-40 sekund davom etadi. Yuqori harorat ta’sirida azotli asoslar orasidagi vodorod bog‘lari uziladi va DNK zanjirlari bir-biridan ajraladi. 2-bosqich. Praymerlami bog‘lash (gibridizatsiya). Harorat pasaytiriladi va praymerlar o‘rganiladigan genlar chegarasidagi o‘ziga komplementar bo‘lgan DNK uchastkasi bilan bog‘lanadilar. Gibridizatsiya 20 dan 60 sekundgacha davom etadi. 3-bosqich. DNK zanjirini sintezi. Bu jarayon DNK - polimeraza yordamida amalga oshadi. Bu ferment, zatravka sifatida praymemi 31- uchini ishlatadi, DNK - polimeraza doimo zanjimi 51 dan З '-uchga qarab tugab (cho‘zilib) boradi. DNK ni yangi zanjirini sintezi uchun 79 material bo‘lib, eritmaga qo‘shiladigan nukleotidlar xizmat qiladi. Bu jarayon 70 -72 °C da o‘tadi va 20-40 sekund davom etadi. PZR ni 1- sikli oxirida, eritmada 2 ta ikki zanjirli DNK fragmentlari hosil bo‘ladi. Ulardan har biri, 1 ta dastlabki zanjir va 1 ta yangi hosil bo‘lgan praymer bilan bog'langan zanjirdan iborat bo‘ladi. Ikkinchi siklda amplifikatsiyani yuqorida aks ettirilgan 3- bosqichni barchasi qaytariladi. DNK zanjirini denaturatsiyasi amalga oshadi. Keyin to‘rtta zanjimi har biri yana praymerlar bilan o‘zaro munosabatga kirishadi va nihoyat qidiriladigan genga mos keladigan ikki tomondan chegaralangan fragment paydo bo‘ladi. Bu fragmentlar - amplikonlar deb atalgan. PZR ni 2-siklini oxirida 2 ta amplikon paydo bo‘ladi(46-rasm). 1-bosqich DENATU- RATSIYA 93-95°C |5 DNKni dastlabki fragmenti 2-bosqich GIBRIDI ZATSIYA г"' 5 3-bosqich 5 DNK zanjirini sintezi ''ф |1М 1Г" lailffliliWHn 72°C 3‘i 45-rasm. PZR ni birinchi siklining sxemasi. ШИШ! ШИШИ ШЦЙМИЙХМиИ 2-bosqich - praym erlar gibiridizatsiyasi 3-bosqich - D N K zanjiri sintezi 46-rasm. PZR reaksiyasining ikkinchi siklining sxemasi. PZR jarayoni zanjirli xarakteriga ega ekanligi bilan farq qiladi: sintez bo‘lgan amplikonlar, keyinchalik o‘zlari matritsa bo‘lib xizmat qiladi. Ularda nusxalanish jarayoni o‘tadi. Mana shuning uchun ham, har bir yangi siklda DNK nusxasini soni geometrik progressiya bo‘yicha oshib boradi (47-rasm). nniir Mm ^ ----- Download 7.32 Mb. Do'stlaringiz bilan baham: |
Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling
ma'muriyatiga murojaat qiling