Реакция с метиленовым синим

Качественные реакции на аскорбиновую кислоту
Материал исследования
1% р-р аскорбиновой кислоты.
Реакция с метиленовым синим
Принцип
Аскорбиновая кислота обладает способностью восстанавливать метиленовый синий, окисляясь при этом до дегидро­аскорбиновой кислоты. Метиленовый синий при восстановлении обесцвечивается.
Проведение анализа
В 1-ю пробирку вносят 5 капель 1% раствора аскорбиновой кислоты, во 2‑ю – 5 капель дистиллированной воды. В обе пробирки вносят по капле 0,01% раствора метиленового синего и ставят в водяную баню при +40С. Наблюдают обесцвечивание жидкости в пробирке с витамином.
Реакция с раствором калия гексацианоферрата
Принцип
Аскорбиновая кислота способна восстанавливать калия гексацианоферрат К₃Fе(СN)₆, окисляясь до дегидроаскорбиновой кислоты. При этом К₃Fе(СN)₆восстанавливается до К₄Fе(СN)₆, который с ионами трехвалентного железа дает соль Fe₄[Fе(СN)₆] сине-зеленого цвета.
Проведение анализа
К 10 каплям 1% раствора аскорбиновой кислоты прибавляют 10 капель 5% раствора калия гексацианоферрата К₃Fе(СN)₆и 5 капель 1% раствора FeCl₃. Наблюдают образование сине-зеленого окрашивания (берлинская лазурь).
Оформление работы
Отмечают принцип методов, ход работы, регистрируют результаты анализа в таблице и делают вывод о возможности обнаружения витаминов данным методом.

Исследуемые витамины	Используемый метод и реактивы	Результат

Лабораторная работа 2
Количественное определение содержания аскорбиновой кислоты
Принцип
Аскорбиновая кислота, содержащаяся в биологическом материале, восстанавливает в 2,6-дихлорфенолиндофеноле кетогруппу до спиртовой группы с образованием окрашенной лейкоформы 2,6-дихлорфенолиндофенола. При полном окислении аскорбиновой кислоты в кислой среде титруемый раствор приобретает розовую окраску. По количеству красителя, затраченному на титрование, определяют количество витамина.
Количественное определение содержания аскорбиновой кислоты в моче
Материал исследования
Моча.
Проведение анализа
В колбу отмеряют 5 мл мочи и 5 мл дистиллированной воды, перемешивают, прибавляют 2,5 мл 2% раствора HCl. Титруют краской Тильманса до розовой окраски, сохраняющейся в течение 30 секунд. Записывают объем.
Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в суточном объеме мочи по формуле:
, где
0,088 – количество витамина С (мг), соответствующее 1 мл 0,001 М раствора краски Тильманса; А – количество краски, затраченной на титрование (мл); Б – средний суточный объем мочи (1000-1500 мл); В – объем мочи, взятый для титрования (мл).
Нормальные величины
Моча 20-30 мг/сут
Клинико-диагностическое значение
Метод используется для диагностики недостаточности аскорбиновой кислоты в организме. Концентрация витамина в моче понижается в 4-5 раз при гиповитаминозе С, токсикозах, бронхопневмониях, острых и хронических инфек­ционных заболеваниях.
Повышение концентрации витамина в моче может быть при избыточном приеме аскорбиновой кислоты или поливитаминных препаратов.
Оформление работы
Отмечают принцип метода, ход работы, регистрируют результаты анализа. Оценивают обеспеченность организма витамином С. Необходимо указать биохимические процессы, требующие наличия аскорбиновой кислоты, и возможные нарушения состояния организма при гиповитаминозе.
Количественное определение содержания аскорбиновой кислоты в растительном материале
Материал исследования
Картофель, плоды шиповника.
Проведение анализа
1. Приготовление экстракта витамина С.
Навеску исследуемого материала (5 г картофеля или 1 г плодов шиповника) помещают в ступку, измельчают при необходимости ножницами и скальпелем, затем растирают с 5 мл 2% р-ра соляной кислоты, постепенно вливая 20 мл дистиллированной воды. Оставляют на 5 минут.
2. Для исследования берут часть экстракта (V₂), который переносят в колбу для титрования. Для экстракта картофеля объемV₂равен 10 мл. Экстракт плодов шиповника берут в объеме 1 мл и разводят с дистиллированной водой в соотношении 1:5,
3. Титруют краской Тильманса до розовой окраски, сохраняющейся в течение 30 секунд. Записывают объем краски, затраченной на титрование.
4. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты (мг в 100 г продукта) по формуле:
, где
0,088 – количество витамина С (мг), соответствующее 1 мл 0,001 М раствора краски Тильманса; А – количество краски, затраченной на титрование (мл); Б – количество продукта, взятого для анализа (г); V₁– общее количество экстракта (мл); V₂– объем экстракта, взятый для титрования (мл); 100 – пересчет на 100 г продукта, В – разведение экстракта шиповника (в 5 раз)
Нормальные величины
Картофель 20 мг/100 г
Плоды шиповника 1500 мг/100 г