Техника приготовления мазка, окраска простым методом

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №17
«МЕТОДЫ ОЦЕНКИ Т И В-ЛИМФОЦИТОВ. ПРИНЦИП ПРИМЕНЕНИЯ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИЧЕСКОГО МЕТОДА»
Цель лабораторной работы.
-Ознакомление современными способами оценки иммунной статуса
Задачи педагога:
- Напомнить студентам о значении иммунной системой, а именно, Т- и В-лимфоцитов;
- Ознакомить студентов с современными способами оценки клеточной и гуморальной факторов иммунной системы.
Результаты лабораторной работы
Студент должен знать:
- Строение иммунной системы, Т- и В-лимфоциты и их значение
- Методы оценки клеточной и гуморальной системы иммунитета, суть и механизм.
Студент должен уметь:
- Оценивать иммунную систему макроорганизма по результатам цитофлюориметрического метода оценки Т- и В-лимфоцитов


Определение Т- и В- лимфоцитов и их субпопуляций современными методами.
Проточный цитофлюориметрический метод(ПЦМ) – этот метод отличется своей быстротой и специфичностью и применяется в анализе клеток крови. В диагностической практике ПЦМ широко применяется при оценке иммунологического статусаорганизма, в онкологии, гематологии, фармакологии.
Преимущества и сфера применения ТЦМ:
-Количественнаяцитометрия – сравнительно новый метод в практике микробиологии, проводятся исследования специальными приборами в дисперсионной среде. Цитометрия может быть статистической или текущей.
В статистической цитометрии используется конфокальные микроскопы для исследований; если нет таких микроскопов, то можно проводитьисследование более дешевым люминесцентным микроскопом, то есть с помощью меченных флюрохромом моноклоналных антител, которые дадут свечение.
Проточная цитометрия - это такой метод, при котором суспензия клеток подается в вибрирующую проточную камеру с форсункой, выбрасывающей капли жидкости , в каждой из которых содержится единственная клетка. Капля проходит сквозь лазерный пучок и расскивают свет. Светорассеяние измеряется с помощью фотоумножителя. .Прямое светорассеяние коррелирует с размером клеток. Боковое светорассеяние (под углом 90º ) коррелирует с гранулярностью клетки и ядерно-цитоплазматическим отношением. Этот метод позволяет отличить крупные клетки с низким ядерно-цитоплазматическим отношением и гранулами в цитоплазме (гранулоциты) от мелких клеток с крупным ядерно-цитоплазматическим отношением (лимфоциты). Сортирование клеток можно проанализировать другим параметром, например их флюоресценцию. Эти частицы учитываются с помощью меченных флюрохромом моноклоналных антител или с помощью радиоактивных веществ. Каждый из количественных цитометрических методов широко применяется в медицинской практике и биологии. Метод поточной цитометрии был создан для определения количестваи размеров частиц в спец. экспериментах.
В современнойпоточной цитометрии применяется два типа аппаратов:
*Первый типдля определения флюоресценции используется аппарат определяюший свет двухволновой длины, распространяющийся под углом 10º и 90º градусов.
*Вторым типом можно определить в сложных смесях частицы и ядра, исследовать более пяти параметров, а также параметры различных клеток
На сегодняшний день определяемые параметры разные и сложные, требуют особой систематики.
Биологические пробы клеток во время исследования приготавливаются.

• 
  Из крови
  
• 
  Из костного мозга
  
• 
  Из ликвора
  
• 
  Из синовиальной жидкости
  
• 
  Из плевральной жидкости
  
• 
  Из перитонеальной жидкости
  
• 
  Из опухолей или здоровых тканей
  

Рисунок 69. Работа с цитометрическим аппаратом.