Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

КРОВИ УРЕАЗНЫМ МЕТОДОМ 
Цель работы: освоить методику количественного определения моче-
вины в крови, уметь объяснить причины отклонения данной константы. 
Принцип метода основан на определении количества аммиака, высво-
бождающегося при разложении мочевины сыворотки или цельной крови 
под действием уреазы, колориметрическим методом с использованием ре-
актива Несслера. 
Порядок выполнения работы: 
В две пробирки налить по 1,5 мл дистиллированой воды и по 10 капель 
препарата уреазы. 
В одну (опытную) добавить 2 капли сыворотки крови, во вторую (стан-
дарт) – 2 капли раствора мочевины с концентрацией 5 ммоль/л (30 мг%). 
Содержимое обеих пробирок встряхнуть и поместить в термостат при 37°С 
на 20 минут. При этом идет ферментативный гидролиз мочевины. 
Вынуть пробирки из термостата, охладить, добавить в обе по 4 капли 
7,5% рачтвора сернокислого цинка, по 4 капли 1,5% раствора гидроксида 
натрия и профильтровать через фильтры, смоченные дистиллированной 
водой. 
В чистые пробирки отмерить по 12 капель фильтрата (в одну – опыт, в 
другую – стандарт), добавить по 2,5 мл 0,2% раствора сегнетовой соли и 
по 10 капель реактива Несслера, перемешать. 
Проколориметрировать опытную и стандартную пробирки на ФЭКе 
при синем (№ 4) светофильтре в кювете с рабочей длиной 5 мм против 
контроля. 
Приготовление контроля: 
В пробирку внести 1,5 мл дистиллированной воды, 2,5 мл 0,2% раство-
ра сегнетовой соли и 10 капель реактива Несслера. 
Рассчитать содержание мочевины в сыворотке крови по формуле: 
X – содержание мочевины в сыворотке крови в ммоль/л,
E
о
– экстинкция опытной пробирки,
Е
с
– экстинкция стандартной пробирки, 
2 – коэффициент пересчета, 

---

27 
5 ммоль/л – содержании мочевины в стандартном растворе. 
В норме содержание мочевины в сыворотке крови колеблется в преде-
лах 3,3-8,3 ммоль/л. 
Данные оформить в виде протокола, сделать вывод.