Учебное пособие для самостоятельной подготовки к экзамену по микробиологии, вирусологии и иммунологии

6. Морфология патогенных спирохет. Классификация, методы выявления.
Спирохеты (spira - виток, chaite - волосы) представляют собой тонкие спирально извитые нити, изогнутые вокруг центральной оси, которая, по-видимому, является пучком слившихся фибрилл.
Патогенные виды относятся к трем родам: Treponema, Borrelia, Leptospira, отличающимся друг от друга структурным особенностями, количеством завитков, типом движения и другими признаками. В структурном отношении клетки спирохет представляют собой цитоплазматические цилиндры, отграниченные цитоплазматической мембраной (ЦМ) от тонкой и эластичной клеточной стенки (КС), которая состоит из наружной мембраны и пептидогликанового слоя. Между ЦМ и цитоплазматическим цилиндром спирохет расположены фибриллы, состоящие, так же как и жгутики бактерий, из белка флагеллина. У трепонем и боррелий имеется два пучка фибрилл, прикрепленных к дисковидным образованиям - блефаропластам, расположенным на обоих концах цилиндра и направленных навстречу друг другу. У лептоспир единичные фибриллы прикреплены на концах клетки к блефаропластам. Фибриллы обеспечивают разные типы движения спирохет: поступательное, вращательное и сгибательное.
Спирохеты, особенно трепонемы, в отличие от других бактерий плохо воспринимают анилиновые красители. Их, так же как простейших, окрашивают краской Романовского-Гимза. Кроме того, для выявления спирохет используют нативные препараты, которые микроскопируют в темнопольном или фазово-контрастном микроскопе.
КЛАССИФИКАЦИЯ СПИРОХЕТ
Царство Procariotae
Отдел Gracilicutes
Класс Scotobacteriae
Порядок Spirochetales
Семейство Spirochetaceae

Род Spirocheta Cristispira Treponema Borrelia Leptospira

Вид T. pallidum B. recurrentis L.interrogans

Методы выявления спирохет
1. Окраска по Романовскому-Гимзе: краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини, перед использованием краску растворяют в воде (к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель продажной краски Романовского-Гимзы). На фиксированный мазок наливают раствор краски на 1 час или погружают мазок в стакан с краской, промывают водой, высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсией.
Бледная спирохета окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, представляет собой тонкие спиралевидные клетки с 8-12 равномерными завитками, длина их 6-20 мкм, ширина 0,09-0,18 мкм.
Боррелия рекуррентис по Романовскому-Гимзе окрашивается в сине-фиолетовый цвет, имеют форму тонкой спирали с 3-8 крупными неравномерными завитками, с одним или обоими заостренными концами, длиной 8-18 мкм и шириной 0,3-0,6 мкм.
Лептоспира окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, в препарате видны спиралевидные микроорганизмы с 12-18 плотно прилегающими друг к другу первичными завиткими, напоминают плотную пружину или «четки» с загнутыми или утолщенными концами. Имеют вторичные завитки, придающие телу S- или С-образную форму. Длина лептоспиры 7-14 мкм, толщина 0,06-0,15 мкм.
2. Микроскопия в темном поле: ее производят при боковом освещении. Чтобы получить яркое боковое освещение, обычный конденсор заменяют специальным параболоид-конденсором, в котором центральная часть нижней линзы затемнена, а боковая поверхность зеркальная. Конденсор задерживает центральную часть параллельного пучка лучей, образуя темное поле зрения. Краевые лучи проходят через кольцевую щель, отражаются от боковой зеркальной поверхности конденсора, собираются в фокусе, и, выходя из конденсора, встречают микробные клетки в препарате «раздавленная» капля, свет от них отражается, меняет направление и попадает в объектив. Микробные клетки при этом ярко светятся. В темном поле наблюдают живые объекты величиной 0,06-0,2 мкм, используя сухую систему (объектив х40). Иммерсионное масло наносят на верхнюю линзу конденсора, оно заполняет пространство между конденсором и предметным стеклом, на котором готовится препарат «раздавленная» капля. При этом у спирохет выявляют особенности морфологии, характер движения, количество и особенности первичных завитков, наличие вторичных завитков.