Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства

§1.6.Фармакологические свойства, применение, форма выпуска и условия хранения

Рибофлавин необходимо хранить в хорошо укупоренных банках оранжевого стекла, учитывая его свойство легко окис­ляться и разлагаться под действием света с образованием биологически неактивных люмихрома и люмифлавина.
Рибофлавин восполняет недостаток витамина В2 в организме. Особенно он важен для нормальной функции зрения. Назначают внутрь в таблетках и драже по 0,005-0,01 г при гипо- и авитаминозе, различных глазных заболеваниях, длитель­но незаживающих ранах и язвах, лучевой болезни, болезни Боткина и т.д.

Глава II. Экспериментальная часть. Валидационная оценка методики качественного и количественного определения.

§2.1. Определение специфичности методики качественного анализа.

Для установления специфичности в идентификационных тестах, основанных на качественных реакциях следует убедиться как в отсутствиях положительного эффекта реакции на сопутствующие вещества, так и в возможном ингибировании данной реакции компонентами образца.
Для определения показателя «специфичность» необходимо было приготовить ряд модельных смесей.
Модельная смесь №1.
В неё входят оба компонента и растворитель (согласно прописи).
Модельная смесь №2
В неё входит только рибофлавин и растворитель.
Модельная смесь №3
В неё входят только KI и растворитель.
Установление специфичности в тестах «Испытание на подлинность»
Оценка подлинности рибофлавина и KI.
Для определения подлинности рибофлавина существуют следующие методы:

1. 
   Реакция с AgNO3
   

К 0,5мл исследуемого раствора прибавляют 5 капель раствора AgNO3через 1-2 мин появляется оранжево- красное окрашивание, переходящеев красное.

2. 
   УФ-спектрофотометрия
   

К 0,5мл исследуемого раствора приливают 9,5 мл воды и измеряют оптическую плотность(Ax) полученного раствора при длине волны около 445 нм. Толщина слоя раствора в кювете – 10 мм, раствор сравнения – вода.
Параллельно проводят аналогичное определение оптической плотности раствора(Aст), состоящего из 0,5 мл 0,22%раствора РСО рибофлавина (0,0002 г/мл) и 9,5 мл воды.
Содержание рибофлавина в процентах вычисляют по формуле:
Х=
Для определения KI используют следующие методы:

1. 
   Реакция с образованием хлороформного слоя фиолетового цвета.
   

К 2 мл раствора йода (3-20 мл йодид -иона) прибавляют 0,2 мл серной кислоты разведённой 16%, 0,2 10% раствора натрия нитрита или 3% раствора железа(III)хлорида и 2мл хлороформа ; при взбалтывании хлороформный слой окрашивается в фиолетовый цвет.

2. 
   Реакция с AgNO3
   

К 2 мл раствора йодида прибавляют 0,5 мл азотной кислоты разведённой 16% и 0,5мл 2% раствора AgNO3 , образуется жёлтый творожистый осадок, нерастворимый в азотной кислоте разведённой 16% и 10% раствора аммиака.

3. 
   Реакция с образованием паров фиолетового цвета
   

При нагревании 0,1г ЛС с серной кислотой концентрированной выделяются пары йода фиолетового цвета.
На основании существующих методов определения подлинности недопустимо использование реакции с AgNO3 , т.к. оба компонента модельной смеси дают положительный эффект.
Таким образом для определения подлинности рибофлавина используют метод УФ-спектрофотометрии.
Для установления специфичности требуется проанализировать модельные смеси №1 и №3 по методике качественного анализа рибофлавина с использованием УФ- спектра.
В результате испытания получились следующие результаты оптической плотности:
Aст=0.486
Ариб=0.705
А_КI=0.013
Эти данные свидетельствуют о том, что метод УФ-спектрофотометии специфичен для определения подлинности рибофлавина, т.к. при длине волны 445 нм и Аст и Ариб имеет максимум поглощения, а А_КI была на уровне дрейфа базовой линии.
Для определения подлинности калия йодида используют реакцию образования паров фиолетового цвета.
Этот метод специфичен для калия йодида, т.к. рибофлавин в тех же условиях и теми же реактивами не дает положительный эффект.
В ходе определения показателя «подлинность» метод УФ-спектрофотометрии специфичен для рибофлавина, а реакция образования паров фиолетового цвета специфична для определения калия йодида.