1 Источники получения ферментных препаратов. Классификация и номенклатура ферментов и ферментных препаратов. Характеристика активности ферментных препаратов

5.Концентрация сухого вещества в исходном растворе. Максимальный выход активного фермента в препарат и наиболее стабильная структура осадка получаются при содержании сухого вещества не более 10-12%.
6.Длительность контакта с растворителем. Следует стремиться сократить это время до минимума, чтобы уменьшить инактивацию ферментов.
Осаждение ферментов высококонцентрированными растворами солей (высаливание). Процесс высаливания зависит от степени гидрофобности белковой молекулы. Белковая молекула имеет гидрофобные участки на поверхности в виде боковых цепей ряда аминокислот (тирозин, триптофан, лейцин, изолейцин, метионин, валин и фенилаланин). На гидрофобных участках молекулы белка при соприкосновении с водой происходит образование слоя, состоящего из ориентированных молекул воды. При добавлении значительного количества соли происходит связывание воды, белок частично освобождается от воды и создаются условия для агрегирования белковых молекул. Растворимость белка резко падает, и он выпадает в осадок. Чем выше концентрация соли, тем быстрее происходит образование осадка.
Хотя высаливание белков в основном определяется гидрофобными взаимодействиями, на этот процесс существенно влияют и другие факторы: рН среды, близость его к изоэлектрической точке белка, температура, степень чистоты ферментного раствора, длительность процесса и т. д. Самую большую растворимость в солевых растворах большинство белков имеет при рН около 7, когда они содержат наибольшее количество заряженных групп, наименьшую растворимость - вблизи изоэлектрической точки. Поэтому целесообразно вести осаждение ферментов методом высаливания при рН вблизи изоэлектрической точки.
Для высаливания могут быть использованы сульфат аммония, сульфат натрия, сульфат цинка и хлористый натрий. Наиболее часто используют сульфат аммония, реже - хлористый натрий.
Самая сложная стадия процесса высаливания - это внесение соли и способ ее растворения. Соль измельчают и медленно добавляют небольшими порциями при постоянном перемешивании, чтобы избежать локальных зон повышения концентрации соли в растворе. Перемешивание должно быть умеренным, без пенообразования. Процесс формирования осадка может длиться от 20-40 мин до нескольких часов. Повышение температуры при высаливании благоприятствует быстрому агрегированию молекул белка в крупные хлопья, поэтому процесс ведут при 20-30°С. При высаливании можно добиться частичного фракционирования комплекса ферментов.