Ҳужайра структурасини бузиб, ичидаги ферментларни ажратиб олиш учун ҳар хил усуллардан фойдаланилади: механик (шарикчалар ёрдамида бузиш; кварц қумлари билан артиш), физик (ультратовуш, гидравлик қимирлатиш, музлатиб-эритиш) ва бошқалар. Бузилган биомассадан ферментни рН кўрсаткичи ферментга тўғри келадиган суюлтирилган буфер ёрдамида амалга оширилади. Ҳужайрани бузилган қисмлари центрафуга ёрдамида ажратилади. Нуклеин кислоталар ферментлар ёрдамида парчаланади ёки юқори молекулали катионлар ёрдамида чўктирилади. Бу операция айниқса нуклеин кислотаси кўпроқ бўлган бактериялар ва ачитқилардан (уларда нуклеин кислоталар миқдори биомассадан 8-12% ни ташкил қилади) фермент ажратишда албатта қўлланилади. - Ҳужайра структурасини бузиб, ичидаги ферментларни ажратиб олиш учун ҳар хил усуллардан фойдаланилади: механик (шарикчалар ёрдамида бузиш; кварц қумлари билан артиш), физик (ультратовуш, гидравлик қимирлатиш, музлатиб-эритиш) ва бошқалар. Бузилган биомассадан ферментни рН кўрсаткичи ферментга тўғри келадиган суюлтирилган буфер ёрдамида амалга оширилади. Ҳужайрани бузилган қисмлари центрафуга ёрдамида ажратилади. Нуклеин кислоталар ферментлар ёрдамида парчаланади ёки юқори молекулали катионлар ёрдамида чўктирилади. Бу операция айниқса нуклеин кислотаси кўпроқ бўлган бактериялар ва ачитқилардан (уларда нуклеин кислоталар миқдори биомассадан 8-12% ни ташкил қилади) фермент ажратишда албатта қўлланилади.
Шундай қилиб культурал суюқликни фильтрати (ҳужайрадан ташқаридаги ферментлар ажратиш учун) ва ҳужайра ичидаги ферментлар экстракти тайёр бўлади. Бу икки эритма бир-биридан нима билан фарқ қилади? Ҳужайра ташқарисидаги фильтрат одатда 15-20 та ҳар хил оқсиллар сақлайди, ҳужайра экстрактида эса оқсил спектри анча кўпроқ бўлади. - Шундай қилиб культурал суюқликни фильтрати (ҳужайрадан ташқаридаги ферментлар ажратиш учун) ва ҳужайра ичидаги ферментлар экстракти тайёр бўлади. Бу икки эритма бир-биридан нима билан фарқ қилади? Ҳужайра ташқарисидаги фильтрат одатда 15-20 та ҳар хил оқсиллар сақлайди, ҳужайра экстрактида эса оқсил спектри анча кўпроқ бўлади.
- Кўпинча, тиниқ ҳолатдаги фермент эритмаси вакуумда парлатиш орқали ёки ультрафильтрация йўли билан қуюлтириб олинади. Бу усуллар фермент эритмасини 5-15 маротаба қуюлтириб олиш имконини яратади.
Do'stlaringiz bilan baham: |
