Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

 
Рис. 7. Схема устройства ячейки полярографа 

---

30 
 
Рис. 8. Схема устройства электрода полярографической ячейки
Определение окислительного фосфорилирования чаще всего 
проводится по методу Чанса-Вильямса (Chance, Williams, 1956). 
Метод основан на том, что в отсутствии АДФ фосфорилирование не 
идет. Окисление же имеет определенную величину. При добавлении 
АДФ в инкубационную среду начинает идти фосфорилирование и 
происходит 
стимулирование 
окислительной 
активности 
митохондрий. Когда весь АДФ превратится в АТФ, окислительная 
активность снижается. Р/О рассчитывается по отношению 
молярного количества добавленного АДФ к количеству 
стимулированного им поглощения кислорода (Р/О=АДФ/О). При 
определении окислительного фосфорилирования необходимо 
учитывать дыхательный контроль (ДК) – отношение скорости 
окисления в присутствии АДФ к скорости окисления после 
исчерпания АДФ (Estabrook, 1967).
Понятие о метаболических состояниях митохондрий. В 
зависимости от скорости переноса электронов, природы факторов, 
лимитирующих 
дыхание 
и 
степени 
восстановленности 
переносчиков 
выделяют 
пять 
метаболических 
состояний 
митохондрий (Estabrook, 1967):

---

31 
1) состояние 1 или эндогенное дыхание наблюдается в 
отсутствии субстратов окисления и акцептора фосфата - АДФ;
2) состояние 2 или «субстратное» характеризуются 
присутствием субстрата окисления, но отсутствием АДФ;
3) 
состояние 
3 
или 
активное 
фосфорилирующее 
(энергизованное) состояние наблюдается в присутствии субстрата 
окисления и АДФ, когда дыхание митохондрий резко активируется, 
в этом состоянии скорость дыхания ограничивается скоростью 
проникновения субстратов в митохондрии и мощностью ферментов 
фосфорилирующего окисления. В этом состоянии происходит 
сопряженное с окислением субстрата фосфорилирование АДФ;
4) состояние 4 или нефосфорилирующее состояние 
характеризуется торможением дыхания вследствие исчерпания 
добавленного АДФ, при этом скорость окисления ограничивается 
недостатком АДФ. В этом состоянии потребление кислорода 
митохондриями связано с утечкой протонов через внутреннюю 
мембрану и функционированием нефосфорилирующих путей 
транспорта электронов;
5) состояние 5 развивается в анаэробных условиях, когда в 
ячейке электрода исчерпывается запас кислорода.