Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

 
Метод Бредфорда 
Основан на адсорбции красителя Кумасси ярко синий G-250. 
При связывании красителя с белком развивается ярко-синяя окраска 
(Bradford, 1976). Поглощение измеряют при 595 нм.
Мешающие 
соединения: 
сильнощелочные 
буферы, 
детергенты SDS. 
Реагенты. Кумасси G-250 (100 мг) растворяют в 50 мл 95%-
ного этанола. Добавляют 100 мл 85%-ной фосфорной кислоты. 
Разбавляют водой до 1 л. 
Ход определения.
А) К 0,1 мл раствора белка (концентрация 10-100 мкг в 0,1 
мл) добавляют 5 мл реагента и перемешивают. Не ранее, чем через 5 
мин и не позднее, чем через 1 ч измеряют поглощение при 595 нм 
относительно чистого реагента. 
Б) К 0,1 мл раствора белка (концентрация 1-10 мкг в 0,1 мл) 
добавляют 1 мл реагента и перемешивают. Не ранее, чем через 5 

---

49 
мин и не позднее, чем через 1 ч измеряют поглощение при 595 нм 
относительно чистого реагента. 
Количество белка в образцах определяют при помощи 
калибровочной кривой. 
Метод Гринберга 
Метод Гринберга и Крэддока основан на адсорбции 
красителя бромфеноловый синий (Greenberg, Craddock, 1982).
Реагенты. 50 мг бромфенолового синего (Реанал, Венгрия) 
растворяют в 40 мл 95% этанола. Реактив фильтруют, добавляют 6 
мл ледяной уксусной кислоты и 10 мл Тритона Х-100. Объем 
доводят до 500 мл бидистиллированной водой.
Ход определения. К 0,1 мл белка добавляют 0,9 мл реагента. 
Через 10 мин после добавления реагента определяют поглощение 
при длине волны 610 нм. Калибровку проводят по бычьему 
сывороточному альбумину (БСА) в разведениях от 0,1 до 1,0 мг в 1 
мл раствора. Раствор БСА готовят на буфере для экстракции белков. 
Повторность калибровки и определения белка 3-х кратная. 
Измерение поглощения в УФ-области спектра 
Метод основан на способности ароматических аминокислот 
(тирозин и триптофан) поглощать УФ-излучение при 280 нм. 
Измеряя величину оптической плотности, судят о количестве 
присутствующего в растворе белка (Скоупс, 1985). Поглощение при 
280 нм дает лишь приблизительное представление об истинном 
содержании белка. 
Мешающие 
соединения: 
нуклеиновые 
кислоты 
и 
нуклеотиды, имеющие пик поглощения при 260 нм. 

---

50