Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных


Download 1.37 Mb.
Pdf ko'rish
bet33/52
Sana24.04.2023
Hajmi1.37 Mb.
#1394351
TuriКнига
1   ...   29   30   31   32   33   34   35   36   ...   52
Bog'liq
pobezhimova полярография

Персульфат аммония в водном растворе разлагается
поэтому его используют только свежеприготовленным. При 
приготовлении гелей он добавляется в последнюю очередь, 
поскольку является инициатором процесса полимеризации. 
Гомолитический разрыв связи между атомами кислорода в 
молекуле персульфата приводит к образованию достаточно долго 
живущих свободных радикалов с одним неспаренным электроном у 
атома кислорода. Такой радикал стимулирует разрыв двойной связи 
в молекуле акриламида и присоединяется к ней таким образом, что 
снова образуется радикал с неспаренным электроном, но у атома С. 


55 
Этот радикал вызывает разрыв двойной связи и присоединение 
следующей молекулы акриламида с образованием нового радикала 
и т.д. Цепная реакция полимеризация идет до тех пор, пока два 
радикала, встретившись между собой не образуют обычную 
ковалентную связь. 
ТЕМЭД – захватывая свободные радикалы, служит 
катализатором реакции полимеризации и ускоряет его протекание. 
Процессы, 
протекающие 
после 
включения 
электрического напряжения. В первый момент напряженность 
поля будет примерно одинаковой во всех зонах геля и начнется 
переход белков из буфера препарата в формирующий гель. В это же 
время в верхней части формирующего геля начнет развиваться 
новая ситуация. Под действием поля ионы Cl
-
будут быстро уходить 
в направлении рабочего геля, а на их место из электродного буфера 
будут поступать ионы глицина, но здесь они окажутся в буфере с 
рН 6,8. При этом, большинство молекул глицина восстановит заряд 
своих аминогрупп, нейтрализуется и перестанет участвовать в 
проведении тока. Сопротивление буфера препарата, а затем и 
верхней части формирующего геля резко возрастет. Вместе с тем 
возрастет и напряженность поля. Немногочисленные при рН 6,8 
заряженные молекулы глицина ускорят свое движение к аноду
обеспечивая непрерывность электрического тока по всему гелю. 
Идет переход белков из буфера препарата в формирующий гель. 
Ионы Cl
-
, отступая, очищают весь объем этого геля. Вплотную за 
ними к границе с рабочим гелем подходит глицин. Концентрация 
белков в формирующем геле не происходит. Впереди идущие 
молекулы белков достигают границы раздела и переходят в рабочий 
гель, где попадают в область с низкой напряженностью поля. 
Скорость их падает. Между тем следующие за ними молекулы 
белка еще движутся в формирующем геле, причем с высокой 
скоростью, они входят в рабочий гель и почти останавливаются
догоняют впереди идущие белки. Весь препарат стягивается в 
узкую полоску. Отсюда и начинается их фракционирование. Чем 


56 
меньше объем наносимого белкового препарата, тем уже будут 
зоны. Желательно наносить белковую смесь на гель в минимальном 
объеме, чтобы высота их слоя была не более 2-3 мм. 

Download 1.37 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   29   30   31   32   33   34   35   36   ...   52




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling