Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

Буфер для переноса: 3,03 г трис + 14,4 г глицин + 100 мл 
метанол доводят до 1 л бидистиллированной водой (рН 9,2 не 
доводят). 

---

75 
Ход проведения окрашивания мембраны 
 
1. Мембрану после промывания заливают раствором первичных 
антител (в зависимости от свежести антител на время от 30 мин до 2 
ч). 
2. Отмывают ТТВS (2 раза по 10 мин). 
3. Заливают раствором вторичных антител (на 1 ч). 
4. Отмывают ТТВS (2 раза по 10 мин). 
5. Заливают буфером с рН 9,5 на 5 мин. 
6. Помещают мембрану в раствор красителя (от 2 до 5 мин) до 
появления окраски. 
7. Отмывают ТТВS (2 раза по 5 мин). 
8. Для сохранения окраски помещают в раствор с рН 2,9 на 5 
мин. 
9. Промывают дистиллированной водой, высушивают на 
фильтровальной бумаге, хранят в темноте. 
10. Мембрану сканируют, по белкам-маркерам определяют 
молекулярные массы полипетидов. 
Необходимые растворы: 
 
ТBS, рН 7,5:  
На 1 л бидистиллированной воды 2,42 г трис, 27,24 г NaCl, 
довести рН до 7,5 с помощью НСl. 
ТТBS, рН 7,5: на 1000 мл ТBS добавить 500 мкл Твин-20. 
РН 9,5: 100 мМ трис, 100 мМ NaCl, 5 мМ MgCl
2.
 
На 100 мл бидистиллированной воды – 1,21 трис + 0,580 г NaCl 
+ 0,0476 г MgCl
2
, довести рН до 9,5 с помощью НСl. 
 
рН 2,9 (Stop solution): 20 мМ трис, 1 мМ ЭДТА. 
На 100 мл бидистиллированной воды - 0, 242 г трис + 0,037 г 
ЭДТА, довести рН 2,9 с помощью НСl. 

---

76 
Красящий раствор: 100 мМ Трис-HCl (рН 9.5) + 100 мМ NaCl + 
5 мМ MgCl
2 
+ 0.17 мг/мл 5-бромо-4-хлоро-3-индолил фосфата 
(BCIP) + 0.33 мг/мл нитротетразолия синего (nBT). 
На одну мембрану: 150 мкл BCIP (2,55мг растворяют в 150 
мкл Н
2
О) + 150 мкл nBT (4,95 мг растворяют в 70% ДМФО) + 15 мл 
буфера 9,5. Красители BCIP и nBT хранят в морозильной камере в 
темноте, готовят непосредственно перед окрашиванием.