Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

3.2 
Перекрестный иммуноэлектрофорез. 
 
Перекрестный иммуноэлектрофорез проводят по Лореллу в 
модификации Кларка и Фримена с незначительными изменениями 
(Остерман, 1983). Первую меру проводят так же, как и при 
описанном выше иммуноэлектрофорезе в агарозе по Грабар и 
Уильямс. На каждом предметном стекле пробивают две лунки для 
образцов, в которые вносят выровненные по количеству белка 
объемы раствора белкового препарата. Электрофорез первой меры 

---

80 
проводят при напряжении 6-8 V/см в течении двух часов при 
температуре 4
0
С. 
Рис. 20. Перекрестный иммуноэлектрофорез по Лореллу. 
Стрелками 
показаны 
линии 
преципитации 
индивидуальных белков. 
После окончания первой меры иммуноэлектрофореза 
агарозный гель разрезают на две полосы параллельно направлению 
миграции белков и укладывают на обращенный к катоду край 
стеклянной пластинки размером 4.5 х 12 см. При этом направление 
разделения белков в первой мере должно быть от центра к обоим 
краям. Остальную часть пластинки заливают 12 мл расплавленной и 
охлажденной до 40
0
С агарозой в смеси с антисывороткой, 
приготовленной на 0.025 М ацетат-барбиталовом буфере с pH 8.9 
так, чтобы новый слой геля имел такую же толщину, как полоса 
первого направления и сплавился с ней в один сплошной слой. 
Стекло со слоем геля на нем помещают на горизонтально 
расположенный столик прибора для электрофореза в агарозе и 

---

81 
припаивают расплавом 1%-ного раствора агарозы к агарозным 
столбикам, находящимся в катодном и анодном отсеках прибора 
для электрофореза. В качестве электродного также используется 
0.025 М ацетат-барбиталовый буфер с pH 8.9. Электрофорез во 
втором направлении проводят при напряжении 3- 4 V/см в 
холодной комнате при и 4
0
С в течение 20 часов. 
Препараты отмывают 0.15 М водным раствором NaCl в 
течение пяти-семи суток с ежедневной сменой отмывающего 
раствора и высушивают. Окрашивают препараты водным 
раствором, содержащим 0.1% Кумасси R-250, 10% этилового спирта 
и 7% уксусной кислоты. Отмывка препаратов производится водным 
раствором, содержащим 25% этилового спирта и 7% уксусной 
кислоты до обесцвечивания фона (Рис. 20). 
Этот 
метод 
позволяет 
определить 
количественное 
содержание каждого из антигенов в белковом препарате.