Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

Окраска и обесцвечивание гелей. После окончания 
электрофореза гели окрашивали в водном растворе, содержащем 
0.1% Кумасси R-250 (“Sigma”, США), 25% изопропанол, 10% 
уксусную кислоту. Для обесцвечивания фона гели переносили в 
раствор, содержащий 10% уксусную кислоту и 15% изопропанол и 
отмывают в течение нескольких часов.
Определение 
молекулярных 
масс 
полипептидов. 
Определение молекулярных масс полипептидов проводят, 
используя в качестве стандартов набор белков (“Pharmacia”, 
Швеция). После окрашивания гели сканируют, и молекулярные 
массы исследуемых полипептидов определяют по калибровочной 
кривой, которую строят для каждого геля по методике, прилагаемой 
к набору, при помощи программы “Sigmagel”. 

---

58 
2.3 
Электрофорез в ПААГ нативного белка в 
градиенте пористости геля 
Электрофорез проводят в блоках полиакриламидного геля 
размером 110х100х1 мм (Anderson et al., 1972) (Рис. 16). 
Рис. 16. Электрофорез нативного белка в градиенте пористости 
ПААГ. 1-анализируемый белок, 2- маркеры 
Стеклянные пластины, одна из которых несколько длиннее 
другой (130х150 и 130х130 мм), отделяют друг от друга с помощью 
прокладок из органического стекла толщиной 1 мм и склеивают 
липкой лентой. В просвет между стеклянными пластинами 
заливают раствор мелкопористого полиакриламидного геля, а затем, 
после его полимеризации, заливают крупнопористый гель. В 

---

59 
последний погружают зубчатый шаблон из 1мм оргстекла для 
формирования восьми карманов для нанесения белковых проб. 
Верхним электродным буфером служит трис-глицин, pН 8,3 
(0,025 М Трис и 0,192 М глицин). Нижний электродный буфер 
имеет такой же состав. Рабочий гель полимеризуют в 0,375 М Трис-
НСl буфере, рН 8,8, а формирующий гель в 0,0625 М Трис-НСl 
буфере, рН 6,8. Анализируемые белки растворяют в буфере, 
который содержит: Трис-НСl (0,0625 М, рН 6,8), 2-меркаптоэтанол 
5%, глицерин 10%, бромфеноловый синий 0,001%. Электрофорез 
проводят, выравнивая объем наносимого белкового препарата по 
количеству наносимого белка, не допуская в то же время перегрузки 
по белку, т.е. не более 25-30 мкг белка на трек.