Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

восстанавливающие агенты (цистеин, аскорбиновая кислота) 
снижают скорость окислительных процессов, например перекисное 
окисление липидов в мембранах митохондрий, защищают 
сульфгидрильные группы от продуктов окисления фенольных 

---

15 
соединений. В среду промывания и при инкубации цистеин не 
вносится, присутствие его в реакционной среде повышает 
окисление эндогенных субстратов митохондрий. Удаление избытка 
двухвалентных 
катионов, 
ингибирующих 
окисление 
и 
фосфорилирование, достигается с помощью хелатирующих 
агентов (комплексообразователей) – ЭДТА и ЭГТА. Хелатирующее 
действие ЭДТА связывают с полианионными свойствами ее 
молекулы, содержащей четыре карбоксильных группы. В среду 
выделения митохондрий вносят ионы металлов, особенно часто 
Mg
++
, который также стабилизирует структуру митохондрий. 
Разобщающее действие на мембраны митохондрий свободных 
жирных кислот устраняется с помощью бычьего сывороточного 
альбумина (БСА), обладающего адсорбирующими свойствами. В 
большинстве случаев используются концентрации от 0,1 до 0,5%. 
Все растворы для выделения митохондрий готовятся на 
бидистиллированной воде. 
Отделение 
митохондриальной 
фракции 
методом 
дифференциального центрифугирования. Дифференциальное 
центрифугирование субклеточных структур основано на различии в 
их размерах и плотности (Рис. 5). Дифференциальное 
центрифугирование используется для разделения компонентов 
гомогената на ряд фракций (обычно пять): ядра, хлоропласты, 
митохондрии, микросомы и надосадочная фракция (смесь 
растворимой фазы цитоплазмы с растворимым содержимым 
вакуоли и любых других разрушившихся органелл). Каждая из 
фракций 
осаждается 
при 
определенной 
скорости 
центрифугирования и времени. Полученные фракции не являются 
чистыми. Во фракции ядер в качестве основных примесей 
содержатся также остатки разрушенных клеток, хлоропласты и 
фрагменты хлоропластов. Фракция хлоропластов обычно загрязнена 
ядрами и ядерными фрагментами. Митохондриальная фракция 
содержит в качестве примеси пропластиды и, если гомогенизация 
была мягкой, микротельца (пероксисомы и глиоксисомы в 

---

16 
зависимости от ткани). Микросомная фракция часто бывает 
загрязнена митохондриями. Все фракции частиц могут быть 
очищены 
путем 
осторожного 
суспендирования 
их 
в 
гомогенизационной среде и повторного центрифугирования при 
таком ускорении, при котором они были первоначально осаждены. 
Однако чаще всего для очистки используется центрифугирование в 
градиенте плотности.