Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

Получение 
мембранных 
фракций 
и 
матрикса 
митохондрий. Для получения мембранных фракций митохондрий и 
матрикса 
используют 
очищенные 
с 
помощью 
перколла 
митохондрии, изолированные из побегов проростков озимой 
пшеницы. Отделение внешней мембраны осуществляют согласно 
методу «сжатие – набухание – сжатие» (Рис. 6) (Guillot-Salomon et 
al., 1997; Побежимова и др., 2001). Для этого к суспензии 
очищенных митохондрий (приблизительно 50-80 мг белка/мл) 
добавляют раствор 2 М сахарозы в соотношении 1:1. Сжатие 
митохондрий проводят при 0
0
С в течение 1ч. Полученную 
суспензию сжатых митохондрий быстро вводят (с помощью 
шприца) в среду, содержащую 5 мМ КН
2
РО
4
и 2 мМ ЭДТА, рН=7,2. 
Соотношение суспензии митохондрий и среды должно быть 1:40. 
Набухание митохондрий проводят в течение 20 мин при 
постоянном перемешивании на холоду. Сжатие митопластов 
(матрикса, окруженного внутренней мембраной) осуществляют 
путем добавления к суспензии набухших митохондрий среды, 
содержащей 2 М сахарозу и 5 мМ MgCl
2
в соотношении 9:1. После 
инкубации в течение 20 мин при 0
0
C суспензию митохондрий 10 
мин центрифугируют при 15000 g для осаждения митопластов. Для 
осаждения наружной мембраны супернатант центрифугируют при 
100000 g в течение 1ч. Митопласты промывают средой выделения 

---

20 
при +2
0
С и разрушают на установке УЗДН-1 в течение 2 мин с 
интервалом 20 сек (Азарашвили и др., 1997). Суспензию, 
полученную в результате обработки ультразвуком, центрифугируют 
при 10000 g в течение 5-10 мин для осаждения неразрушенных 
митопластов. После этого супернатант центрифугируют при 100000 
g в течение 1ч, в результате чего получают внутренние мембраны 
(осадок) и матрикс (супернатант).