Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

Очистка полученной фракции путем повторного 
промывания. Как было отмечено выше, для получения более 
чистой фракции используют прием повторного промывания (Рис. 
5А). Для этого осадок органелл суспендируют в среде промывания 
и центрифугируют в течение такого времени и при тех ускорениях, 
которые были использованы для осаждения данной фракции. 
Очистка полученной фракции путем центрифугирования 
в градиенте плотности. Суспензия промытых митохондрий может 
быть использована для очистки в градиенте сахарозы, перколла и 
других веществ. В настоящее время для очистки митохондрий 
используют перколл. Суть метода состоит в наслоении суспензии 
неочищенных митохондрий на поверхность градиента и 
центрифугирования при высоких режимах ускорения. Под 
действием центробежной силы компоненты митохондриальной 
фракции проходят через градиент перколла и разделяются на 
отдельные зоны (полосы) в соответствии с их относительной 
плотностью (Рис 5Б). Можно использовать как непрерывный 
самообразующийся градиент, так и прерывистый. Использование 
нетоксичного перколла позволяет проводить быструю очистку 
митохондрий 
в 
изоосмотических 
условиях. 
Перколл, 
представляющий собой взвесь коллоидных частиц силикагеля 
(диаметр 15-30нм), покрытых поливинилпирролидоном (ПВП), 
почти идеальный материал для разделения митохондрий высших 
растений. В отличие от сахарозы он не дает отрицательных 
осмотических эффектов. Поэтому субклеточные органеллы 
образуют полосы при плотности более низкой, чем в сахарозном 

---

17 
градиенте. Кроме того, ПВП, покрывающий частицы силикагеля, 
может активно связывать гидролазы. Концентрации растворов 
перколла, используемых для создания градиента (объем/объем), и 
режимы центрифугирования необходимо тщательно подбирать 
соответственно 
происхождению 
митохондрий 
и 
природе 
загрязнений.