Актуальность применения культур клеток в различных областях биологии, медицины и сельского хозяйства

28. Методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных микроорганизмов
Существуют следующие методы:
1) Механическое разобщение
– метод серийных разведений в жидких питательных средах (Пастер): из исследуемого материала делают ряд последовательных разведений в жидкой питательной среде. Для этого каплю посевного материала вносят в пробирку со стерильной жидкой средой, из нее каплю переносят в следующую пробирку и так засевают до 8…10 пробирок. С каждым разведением количество микробных клеток, попадающих в среду, будет уменьшаться и можно получить такое разведение, в котором во всей пробирке со средой будет находиться только одна микробная клетка, из которой разовьется чистая культура микроорганизма. 
– метод пластических разведений на плотных питательных средах (Кох): применяют, если в исследуемом материале содержится много бактерий. Готовят десятикратные разведения материала в пробирках, затем выливают содержимое пробирок в стерильные чашки Петри, заливают 20 мл расплавленного и остуженного до 45⁰С МПА, перемешивают, дают агару застыть и инкубируют чашки в термостате.
– метод рассева материала по поверхности плотных питательных сред (по Дригальскому): при таком посеве материал, находящийся на петле, расходуется постепенно, и по линиям сетки, нанесённым в конце посева, вырастают изолированные колонии бактерий.
2) Физический – для выделения спорообразующих микроорганизмов материал обрабатывают t°=70-80°С, при этом вегетативные формы погибают, остаются только споры.
3)Химический – материал обрабатывается кислотой, некислотоустойчивые бактерии гибнут, а кислотоустойчивые (возбудители туберкулёза) остаются в чистой культуре.
- антибиотики: основан на избирательной чувствительности определённых видов бактерий к отдельным антибиотикам. При посеве смеси бактерий на среду с добавлением антибиотика, вырастают нечувствительные к нему бактерии: выделение микоплазм на средах с пенициллином, выделение анаэробов на средах с аминогликозидами.
- красители: красители добавляют к питательным средам для подавления роста сопутствующей флоры.
4) Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический) основан на избирательной чувствительности животных к микроорганизмам различных видов. Это выражается в быстрой скорости размножения определенного вида микроорганизмов при попадании в кровь и внутренние органы животного, откуда их затем выделяют. При этом другие виды микробов погибают под действием защитных факторов организма животного. Так выделяют, например, чистую культуру пневмококков из организма белой мыши, чистую культуру палочки туляремии из организма морской свинки.
При по­лучении чистой культуры аэробных и анаэробных бактерий есть различия.
Аэробов выращивают в обычных условиях кислородной сре­ды при температуре 37°С в термостате. Полученный материал микроскопируют и высева­ют на плотную среду, при этом механически разобщают микроорганизмы (разведением). Посевы помещают в термостат на 24-48ч при температуре 37°С. Затем на чашках Петри с по­севами изучают специфические признаки колоний (размеры, форму, прозрачность колоний, поверхность, характер краев, структуру…). Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму (грамотрицательные – красные, грамположительные – фиолетовые) и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения ЧК в достаточном количестве – культивируют в термостате 24-48 ч при температуре 37 °С. Изучают морфологические, тинкториальные, БХ, серологические свойства.