Diagnostikaning zamonaviy usullari Zamonaviy laboratoriya tadqiqot usullari

Parvoz vaqti massa spektrometriyasi (MALDI-TOF

MS) molekulalar yoki atomlar massasini o'lchashga asoslangan butun bakteriya hujayralarini va ularning asosiy tarkibiy qismlarini o'rganishning spektral usuli bo'lib, mikroorganizmlarning turlarini aniqlash uchun to'g'ridan-to'g'ri oqsil profilini aniqlashga va dori vositalariga chidamliligining genetik belgilarini aniqlashga imkon beradi. Ushbu usulning afzalliklari mikroorganizmlarning turlarini aniqlashning yuqori tezligi (2-5 min.), tadqiqotning barcha bosqichlarini avtomatlashtirish va robotlashtirish imkoniyati va yuqori o'ziga xoslikdir. Biroq, tadqiqotning o'zini o'tkazish uchun mikrobiologik usullar yordamida mikroorganizmning sof madaniyatini ajratib olish kerak, bu yuqorida tavsiflangan MALDI-TOF MS dan foydalanishda bir qator cheklovlarni keltirib chiqaradi. Identifikatsiya sifatiga namuna tayyorlashning barcha bosqichlariga rioya qilish ta'sir qiladi, madaniyat miqdori va individual mikroorganizmlarning tur ichidagi o'zgaruvchanligi. Mass-spektrometriya yordamida patogenlarning mikroblarga qarshi preparatlarga sezgirligini aniqlash qobiliyati genetik belgilarni aniqlash bilan chegaralanadi va genotipik o'zgarishlar tufayli yuzaga kelmaydigan, lekin ko'pincha etiotropik davolashning samarasizligida muhim rol o'ynaydigan fenotipik qarshilikni aniqlashga imkon bermaydi. Shuningdek, ushbu usulning muntazam amaliyotda keng qo'llanilishini cheklovchi omillarga massa spektrometrlarining yuqori narxi kiradi. lekin ko'pincha etiotropik davolashning samarasizligida muhim rol o'ynaydi. Shuningdek, ushbu usulning muntazam amaliyotda keng qo'llanilishini cheklovchi omillarga massa spektrometrlarining yuqori narxi kiradi. lekin ko'pincha etiotropik davolashning samarasizligida muhim rol o'ynaydi. Shuningdek, ushbu usulning muntazam amaliyotda keng qo'llanilishini cheklovchi omillarga massa spektrometrlarining yuqori narxi kiradi.

Molekulyar genetik usullar, masalan, polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR), KENG RANGE PCR va evolyutsion saqlanib qolgan genlarni tahlil qilish, sekvensiya/pirosekvensiya, genom parchalanishi va fragment spektrini tahlil qilish, mikroarraylarda duragaylash, genomik duragaylash, genomik kuchaytirish va boshqalar.

Hozirgi vaqtda molekulyar genetik tadqiqot usullari orasida PCR yuqumli kasalliklar diagnostikasida eng keng qo'llanilishini topdi, bu arzon va foydalanish uchun qulay qurilmalarning paydo bo'lishi tufayli laboratoriyalarning kundalik ishlarida mustahkam o'rin egalladi. PCR ma'lum bir DNK ketma-ketligini takroriy nusxalash (amplifikatsiya) ning sun'iy jarayoniga asoslangan bo'lib, in vitroda amalga oshiriladi, so'ngra turli usullar yordamida kuchaytiruvchi mahsulotlarni aniqlash. Zamonaviy laboratoriya diagnostikasi muammolariga to'liq javob beradigan aniqlash usullaridan biri bu real vaqt rejimida aniqlash bo'lib, u yopiq naychalarda amplikonlarning ko'rinishini va to'planishini ro'yxatga olish imkonini beruvchi eng texnologik usul bo'lib, PCR mahsulotlarining kontaktini yo'q qiladi. atrof-muhit bilan va amplikonlar bilan ifloslanish xavfi; tahlil qilish vaqtini qisqartirish; natijalarni ro'yxatga olishning yuqori ishonchliligini ta'minlaydi va umuman laboratoriyani tashkil qilishni soddalashtiradi.

PCR ning afzalliklari quyidagilardan iborat:

-patogen DNKning ma'lum bir hududini aniqlash orqali patogenlar mavjudligini to'g'ridan-to'g'ri aniqlash (chiqindi mahsulotlar emas), bu infektsiya qo'zg'atuvchisi mavjudligini bevosita ko'rsatadi;

- yuqori o'ziga xoslik, chunki bu patogenga xos bo'lgan noyob DNK fragmenti aniqlangan va o'zaro ta'sir qiluvchi antijenler tufayli xatolar yo'q;
- boshqa diagnostika usullari ijobiy natija bermagan hollarda PCRni qo'llash imkonini beruvchi patogenlarning hatto bitta hujayralarini aniqlash bilan ta'minlangan o'ta sezgirlik;
-turli patogenlarni aniqlash tartibining universalligi va bitta bioassedan turli infektsiyalarga tashxis qo'yish imkoniyati;
- tahlil natijalarini olishning yuqori tezligi, chunki patogenni izolyatsiya qilish, etishtirish talab qilinmaydi;
- nafaqat o'tkir, balki sust, latent infektsiyalarni ham aniqlash, etishtirish qiyin bo'lgan, etishtirilmaydigan, mikroorganizmlarning doimiy shakllarini, hujayra ichidagi parazitlarni aniqlash imkoniyati.

Afzalliklar bilan bir qatorda molekulyar genetik usullar bir qator kamchiliklarga ega, masalan, mikroorganizmlarning xususiyatlarini o'rganishga imkon bermaydigan patogen madaniyat izolyatsiyasining yo'qligi; mikroblarga qarshi vositalarga fenotipik qarshilikni aniqlashning mumkin emasligi (faqat genetik qarshilik belgilarini aniqlash mumkin); yuqumli kasalliklar patogenlarining to'liq bo'lmagan diapazonini aniqlash uchun ro'yxatdan o'tgan test tizimlari mavjudligi bilan bog'liq ayrim cheklovlar.

Shunday qilib, yuqumli kasalliklarning zamonaviy laboratoriya diagnostikasi turli xil tadqiqot usullari va usullarining keng doirasiga ega bo'lib, ularning kombinatsiyasi muntazam amaliyotda foydalanish uchun mavjud bo'lgan vazifalarni tezda hal qilish imkonini beradi.
Laboratoriya tadqiqot usullaridan olib tashlashni davolashni aniqlash va davolashning diqqatidan biridir. Hozirgi vaqtda tadqiqot arsenalida o'n yilliklarda paydo bo'lgan va amaliyotda keng qo'llanma klassik va eng yangi laboratoriya diagnostikasining turli usullari mavjud. Klinik laboratoriya diagnostikasi tibbiyotining eng jadal rivojlanayotgan sohasi bo'lib, zamonaviy ilm-fan yutuqlarini faol joriy etadi va qo'llaydi.

Yuqumologik molekulalarni laboratoriya diagnostikasining asosiy usullariga immunologik, mikrobiologik va yarr genetik omillar, bir yangi usullar bilan.

Noma'lumlarni immun diagnostik sarumlarda mavjud bo'lgan ma'lum ma'lum antikorlar yordam uchun immunologik usullar qo'llash; kasallik, serologik diagnostika uchun - ma'lum bo'lgan AG diagnostikum yordam-noma'lum antikorlarni aniqlash. Hozirgi vaqtda zamonaviylarga nisbatan ko'plab usullar mavjud. Eng mashhur va qo'zg'atuvchi immunologik usullar keng tarqalgan kasalliklar: aglyutinatsiya reaktsiyasi (RA), bilvosita (passiv) aglutinatsiya reaktsiyasi (IRGA / RPHA), yog'ingarchilik reaktsiyasi (RP), immunoelektroforez reaktsiyasi (RIEF), komplement fiksatsiyasi reaktsiyasi (C FR) ), immunofloressensiya. reaktsiya (RIF), ferment immunoassay (ELISA). Bu usullar uzoq vaqtdan beri davolashni tashxislashda qo'llanilgan va tibbiy amaliyotda mustahkam o'rin olgan. Vaqtinchalik aylangan bular bo'yicha usullar, tezkor dasturiy ta'minot beradi, kech klassik aglutinatsiyasi, immunoxromatografik testlar kabi zamonaviy usullar yordamida ishlab chiqariladi. So'nggi o'n yillikning yutug'i tadqiqot natijalarini yig'ish va tahlil qilish jarayonlarini avtomatlashtirish turli xil jihozlarning yaratilishi bo'ldi.

Yuqumli jarohatni laboratoriya diagnostikasi uchun immunologik usullarning ishlab chiqarishdan iborat: kelib chiqishini olishning yuqori tezlik, jarayonning dinamikasini ishlab chiqarish, o'tkir va infektsiyalarga infektsiyani qo'llash, madaniy bo'lmagan va hosil bo'lgan infektsiyalarni hosil qilish. mikroorganizmlarni etishtirish.

qilish, bu usullar guruhi har doim ham yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslikni ta'minlamaydi. O'zaro reaktiv gipertenziya tufayli diagnostik xatolar mavjud. Bundan tashqari, patogenlar xavfsizligini ta'minlashning bilvosita usullari bilan bog'liq bo'lgan immunologik infektsion agentlarni va fayllarni to'g'ridan-to'g'ri o'rganishga imkon bermaydi (masalan, mikroblarga qarshi himoya vositalariga s ezgirlik kabi) va mikroorganizmlarni bir -biri bilan tartibgash zarur, bu zarur. epidemiologik manba uchun, infektsiyani yuqtirishlari, usullari va usullarini izlash.

Bu muammoni qo'llash mikrobiologik diagnostika vositalarini qo'llab-quvvatlaydigan mikrobiologik kasalliklarni aniqlash, bu virusni davolash usullarini aniqlash, antibakterial vositalarni aniqlash, turli xil biologik mahsulotlarni o'rganish va boshqalarni aniqlash. .

Shu bilan birga, mikrobiologik usullarning sezgirligi ko'p ta'minlash diagnostikadan oldingi diagnostika, analitik va postanalitik bosqichlarida tadqiqot jarayoni va yordami bilan bir qator xavfsizlikka bog'liq. Bu, birinchi navbatdagi, namuna olish, ularning yuk va saqlash joylariga tegishli; selektiv madaniyatning harakat va harakat; patogenlarning turlarga; tadqiqotchi bilish malakasi. Bundan, etishtirish qiyin va etishtirilmaydigan mikroorganizmlar kasalliklarga qarshi vositalarni mikrobiologik yordamga yordam beradigan mikroorganizmlar. Ekishdagi zarar bir qator sabablarga ko'ra bo'lishi mumkin, masalan, mikroorganizmning ruhiy muhitga va / yoki etishtirish sharoitlariga (anaeroblar, mikroerofillar va boshqalar), jarayonning yordami, Tarixda yoki turli mikroblarga qarshi turishni vaqtida qo'llash va qo'zg'atish 'atuvchining biologik xususiyatlarini o'chirish (kultivatsiya qilish qiyin bo'lgan holatga o'tish) va boshqalar Ba'zi patogenlarni (viruslar, xlamidiya, va ) an' ' naviy mikrobiologik laboratoriyada davolashni davolashning universal bakteriologik tekshirish haqida gapirishga imkon bermaydi. yana bir omil. Bundan tashqari amalga oshirish ko'pincha uzoq vaqt talab qiladi ) an'anaviy mikrobiologik laboratoriya tekshiruvini aniqlashning universal usuli sifatida bakteriologik aniqlash haqida gapirishga imkon bermaydigan yana bir omil. Bundan tashqari, ulardan amalga oshirish ko'pincha uzoq vaqt talab qiladi, bu esa ekspress diagnostika o'tkazishni imkonsiz qiladi va etiotMaqsad. Ushbu tadqiqot NS uchun rejalashtirilgan va rejadan tashqari diagnostika usullarini qiyosiy tahlilini o'tkazishga qaratilgan.
immunochip asosidagi innovatsion texnologiyalarni eksperimental sinovdan o‘tkazish.
material va usullar. Biz NS bilan og'rigan 49 bemor va 24 nazorat sub'ektining qon zardobi va miya omurilik suyuqligini (CSF) tahlil qildik,
sifilis bilan kasallanmaganlar. Bemorlarga qon zardobining immunokimyoviy testlari va CSF tahlillari, shu jumladan, o'tkazildi
umumiy oqsil va hujayralar sonini baholash, rejalashtirilgan treponemal bo'lmagan va treponemal testlar, shuningdek VDRL usuli (Venereal)
NS tashxisini o'rnatish uchun Rossiya Federatsiyasida rejalashtirilmagan kasalliklarni o'rganish laboratoriyasi). Diagnostik
immunochiplarning eksperimental partiyasining samaradorligi (ularning yuzasida mikrozonalar (massivlar) bo'lgan aldegid bilan faollashtirilgan shisha slaydlar).
Treponema pallidumning diagnostik ahamiyatga ega bo'lgan "bosilgan" immunodominant antigenlari bilan: Tp47, Tp17, Tp15)
NS bemorlarida tasdiqlangan va baholangan.
natijalar. NS bilan og'rigan bemorlarning qon zardobi namunalarini tahlil qilish diagnostik sezgirlik, o'ziga xoslik va samaradorlik ekanligini ko'rsatdi.
VDRL uchun mos ravishda 97,9, 100 va 98,6% va mikrocho'kindi testi (MPT) uchun 100%. Treponemaga xos usullarning diagnostik sezgirligi, shu jumladan immunoxip texnikasi 100% ni tashkil etdi. Fermentning diagnostik o'ziga xosligi va diagnostik samaradorligi
immunoassay (ELISA) va immunochiplar 100% edi. CSF namunalarining umumiy klinik sinovlari past sezgirlikni ko'rsatdi (hujayralar soni -
27%, oqsil - 30,6%). Treponemal bo'lmagan testlar yuqori o'ziga xoslikka qaramay past sezuvchanlikka ega edi (MPT - 12,2%; VDRL - 38,8%)
(100%). Biroq, VDRL ning sezgirligi barcha NS shakllari bo'lgan bemorlarda MPT bilan solishtirganda 3 baravar yuqori bo'lgan.
asemptomatik NS diagnostikasi, simptomlari bo'lgan NS tashxisida esa 6 baravar yuqori. Treponemal testlar orasida
eng yuqori sezuvchanlik Elishay (98%), immunofluoressensiya testining butun SCF bilan modifikatsiyasi (100%) va immunochiplar uchun aniqlandi.
(100%). Elishay va immunochiplarning diagnostik o'ziga xosligi 100%, diagnostik samaradorlik mos ravishda 98,6 va 100% edi. CSF
immunochiplar yordamida tahlil namunalarning 100 foizida Tp17 antijeniga, ikki yoki undan ortiq turli kombinatsiyalarga antikorlarni aniqladi.
antijenler - namunalarning 85,7% da.
Xulosa. Treponemal bo'lmagan VDRL qon zardobi va CSF testlarida MPTga qaraganda yuqori diagnostik samaraga ega ekanligi aniqlandi.
NS bemorlarining soni va shuning uchun ushbu usullarni NS uchun rejalashtirilgan diagnostika usullari ro'yxatiga kiritish tavsiya etiladi. immunochip,
Treponema pallidumning 4 ta rekombinant antijeni (Tr17, Tr15, Tr47, TmpA) ham klinik amaliyotda muvaffaqiyatli qo'llanilishi mumkin.
NS diagnostikasi uchun dori, bu qon zardobi va CSF tahlilida uning yuqori diagnostik samaradorligidan dalolat beradi.