Фармамакологик биокимё

Услубнинг асоси.  Холестерин сирка ангидриди иштрокида сирка ва сульфат
кислоталари аралашмалари билан рангли махсулот щосил =илади. Рангнинг
интенсивлиги колориметрда ани=ланади.
Текшириш материали. +он зардоби ва ты=имаси
Жихозлар ФЭК, лаборатория центрифугаси, 25, 50мл-ли колбалар,
пробиркалар, воронка, щар хил хажмдаги пипеткалар, сув щаммоми,
термометр ва 0,5 см =алинликдаги кюветалар
Реактивлар Ишчи реактив-тажриба ытказилишидан олдин 1 =исм
концетрланган сирка кислотаси 5 =исм сирка ангидриди аралаштирилиб,
устига 1 =исм концентрланган сульфат кислотаси нищоят асталик билан,
исишга йыл =ыймай, арлаштириб турган щолда =ышилади. Этил спирти,
диэтил эфир, хлороформ, холестерининг стандарт эритмаси 22-2мг/мл
1.
Холестерин ми=дорини =он зардобида ани=лаш.
+уру= ва тоза пробиркага 2мл ишчи реактив (шиша цилиндрда ылчанади) ва
0,1мл гемолизланмаган зардоб солинади. +он зардоби секинлик билан
пробирка девори быйлаб томизилиши керак. Пробиркадаги сую=лик 10-12
марта яхшилаб чай=атилиб, 37
0
термостатга 20 минутга ырнатилади. Назорат
намунасига =уру= пробиркага 2мл ишчи реактив олинади. Эритмаларнинг
ранги ФЭК да =изил нур фильтрида назоратга нисбатан ылчанади.
Холестериннинг намуналардаги ми=дори калибрлаш эгри чизи\и быйича
ани=ланади.
2. Холестерин ми=дорини ты=ималар таркибида ани=лаш.
Холестерин асосан хужайра мембранаси таркибига кирганлиги туфайли, уни
ты=
ималардан органик эритувчилар (масалан, хлороформ) ёрдамида
экстракция =илиб олинади.
Ишнинг бажарилиши.

---

100мг майдаланган бош мия (ёки бош=а ты=има ) 25мл ли ылчовли колбага
солиниб, унга 15мл спирт-эфир (3:1) аралашмаси =ышилади, яхшилаб
аралаштиргач 50
0
С ли сув хаммомига =ыйилади ва 30 секунд давомида
охиста =айнатилади (аралашма колбадан чи=
иб кетмаслиги керак .)
Аралашма совитилиб, умумий хажми 25мл га етгунча спирт-эфир
аралашмаси (3:1) =ышилади, колбадаги сую=лик чай=атилиб , фильтрланади.
Фильтратдан 10мл олиб косачага =ыйилади ва сув хаммомида =уригунча
=
издирилади (иш мырили шкафда олиб борилиши, барча алангалар
ычирилиши шарт). Рангли реакцияни щосил =илиш учун шлифланган 10мл
га ли пробиркага 5мл холестерининг хлороформли эритмасидан =уйиб, унинг
устига 1мл сирка ангидрид ва 4 томчи концентрланган сульфат кислота
=
ышилади . Пробиркадаги сую=
лик аралаштирилиб , хажми 10мл га
етказилади, чай=
атилиб аралаштирилгач , рангни тини=
лаштириш учун
=
орон\и жойга 25 минут =ыйилади. Хосил былган яшил рангнинг
интенсивлиги ФЭК да 656нм да ани=ланади . Назорат сифатида ылчов
пробиркасига 5мл хлороформ, 1мл сирка ангидриди, 4 томчи концентрланган
сульфат кислота ва яна хлороформ =ышиб, хажми 10мл га етказилган
эритмадан фойдаланилади. Холестерин ми=дори калибрлаш эгри чизи\и
ёрдамида ани=ланади . Калибрлаш эгри чизи\и жадвалда кырсатилганидек
таркибий =исмлар =ышилгач, 25 минутдан кейин ФЭК да колориметрланади.
Стандарт эритмадаги рангнинг оптик зичлиги ординатага, холестерин
=иймати абсцисса ы=ига =ыйилиб, график чизилади.
Иш тартиби
1 2 3 4 5 6 7 8
9 10
холестерининг
стандарт
эритмаси, мл
0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
сирка ангидриди
мл
1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
сульфат кислота
томчиларда
4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
хлороформ
умумий хажми 100 мл былгунча =ыйилади -
холестерин
ми=дори мг-да
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
0,7 0,8 0,9 1,0