Химические составляющие зеленой кожуры плодов персидского ореха

2. Материалы и методы
2.1 Растительные материалы
Зрелые плоды грецкого ореха персидского (J. regia L. сорт «Sardoieh») были собраны в деревне Сардои в провинции Керман в Иране в сентябре 2021 года. Местом отбора проб был горный холодный регион на высоте 2603 м над уровнем моря. . Расстояние между посадками в саду составляло 7 × 7 м в виде квадратной системы, а возраст деревьев составлял 10 лет. Отбор проб проводился с четырех сторон не менее 20 различных деревьев. С каждого дерева отбирали не менее 10 плодов грецкого ореха. После передачи в лабораторию кожуру отделяли и анализировали.
2.2 Ручное секционирование и цитохимические исследования
2.2.1 Приготовление красителя
Метиловый зеленый: этот краситель использовался для наблюдения за лигнином клеточных стенок. Один г порошка красителя растворяли в 20 мл
80% этанол. Этот раствор достигал объема 100 мл при добавлении 20% этанола [10]. Конго красный: краситель конго красный использовался для наблюдения за целлюлозой клеточных стенок. Один г порошка красителя растворяли в 100 мл дистиллированной воды [10]. Для изучения компонентов клеточной стенки срезы погружали в 5% гипохлорит натрия на 5 мин, а затем в 3% уксусную кислоту на 3–5 мин. Затем их замачивали в метиловом зеленом от 13 до 20 с и после промывки избытка красителя дистиллированной водой от 12 до 15 мин в конго-красном. Затем срезы погружали в воду и глицерин [10]. Для изучения содержимого клеток использовали следующие красители: Йод Люголя: этот краситель использовали для наблюдения за содержанием крахмала в клетках. Десять г йодида калия растворяли в 100 мл дистиллированной воды. Затем добавляли 5 г кристаллического йода, осторожно перемешивали и пропускали через фильтровальную бумагу [10]. Периодическая кислота Шиффа (PAS): Периодическая кислота Шиффа использовалась для наблюдения за общим содержанием полисахаридов в клетках. Для приготовления раствора йодной кислоты 0,5 г ее порошка растворяли в 100 мл дистиллированной воды. Для приготовления реактива Шиффа в пробирку Фалькона наливали 10 мл формалина и по каплям добавляли реактив Шиффа, чтобы он стал розово-фиолетовым. Срезы помещали в раствор периодической кислоты на 5 мин, затем промывали водой и помещали в реактив Шиффа на 15 мин [11]. Ванилин: этот краситель использовался для наблюдения за содержанием танина в клетках. Срезы немедленно погружали в раствор насыщенного спиртового ванилина примерно на 5 мин. Затем добавляли несколько капель концентрированной соляной кислоты и наблюдали наличие плотного танина в виде ярко-фиолетовой окраски [12]. Хлорид железа: это вещество использовали для наблюдения за содержанием фенолов в клетках [13].