Искусственное осеменение

Техника подсчета концентрации в камере с сеткой Горяева

Вся сетка имеет площадь в 9 мм² и состоит из 15 горизон- тальных и вертикальных полос, пересечение которых образует 225 больших квадратов. 25 из них разделены на 16 малых квадратов. Площадь одного большого квадрата равна ¹/₂₅ мм², а одного малого ¹/₄₀₀ мм². Глубина камеры составляет 0,1 мм.

Подсчет спермиев производят в пяти больших разделенных квадратах, расположенных по диагонали, или в четырех квадратах по углам сетки и в пятом – где-нибудь в центре.
При подсчете спермиев во внимание принимают только их го- ловки, расположенные внутри квадрата, а также лежащие на верх- ней и левой линиях квадрата. Головки спермиев, лежащие на ниж-
ней и правой линиях относятся к другим соседним квадратам (ри- сунок 41 и 42).

Рисунок 41 – Спермии в малых квадратах сетки Горяева
Рисунок 42 – Порядок подсчета спермиев в большом квадрате

Подсчитав количество спермиев в пяти больших квадратax, т. е. в 80 малых, определяют концентрацию по следующей формуле:

n  D  400  P  1000
С  _,
N

где: С – концентрация спермиев;

n – число спермиев в пяти больших или 80 малых квадратах;
D – степень разбавления спермы;
N – количество малых квадратов в пяти больших (80);
P – глубина камеры, равна 0,1 мм; 400 – число малых квадра- тов на площади в 1мм²; 1000 – коэффициент пересчета на 1 милл.

0. Определение концентрации спермиев с помощью фотоэлектрокалориметра ФЭК-М

Принцип работы прибора основан на том, что при прохожде- нии света через мутные среды (к каким относится также сперма), часть световых лучей поглощается, а остальные поступают на се- леновый фотоэлемент, соединенный с гальванометром. По откло-

нению стрелки гальванометра высчитывают поглощающую спо- собность спермы, последняя зависит
от количества содержащихся в ней спермиев.
Вначале путем поворота риски стрелки гальванометра устанавли- вают на нулевое деление, затем гальванометр присоединяют к при- бору, а прибор, в свою очередь, – через стабилизатор к сети, но вы- ключатель последнего должен сто-

ять на отметке «выключено» (рису- нок 43).
Рисунок 43 – Прибор ФЭК

Рукоятку чувствительности в приборе, а также счетный бара- бан по красной шкале устанавливают на нулевое деление, а затем переключатель стабилизатора переводят на отметке «включено» и в течение 15–20 мин проводится нагревание прибора.
За это время подготавливают исследуемые растворы: в два флакона из под пенициллина наливают по 10 мл 3,5%-го раствора лимоннокислого натрия. В один из них добавляют исследуемую сперму быка 0,1 мл (разбавление в 100 раз). Для исследования спермы барана берут 0,025 мл (разбавление в 400 раз), хряка – 0,20 мл на 6 мл (разбавление в 30 раз). Спустя 15–20 мин после включе- ния прибора в электросеть рукоятку светофильтра ставят на крас- ный свет. Затем в кюветодержатель ставят кюветы, наполненные до метки 3,5%-ным раствором лимоннокислого натрия, открывают шторку света и проводят выверку прибора. Для этого рукоятку чувствительности ставят на деление 1 и рукояткой наводки уста- навливают стрелку гальванометра на нулевое деление. Затем руко- ятку чувствительности устанавливают на цифру 2 и рукояткой тон- кой настройки стрелку гальванометра снова устанавливают на ну- левое деление. После выверки закрывают шторку света, а в правый держатель ставят кювет с исследуемой спермой, затем рукоятку чувствительности переводят на нуль, открывают шторку света, и рукоятку чувствительности ставят на единицу. При этом происхо- дит отклонение стрелки гальванометра. Поворотом счетного бара-

бана устанавливают стрелку на нулевое деление, а затем рукоятку чувствительности на цифру 2 и вторично вращением барабана устанавливают стрелку гальванометра на нулевое деление. Деление 0,05 на красной шкале счетного барабана соответствует 100 млн спермиев в 1 мл.

0.