Искусственное осеменение

Определение концентрации спермы жеребца по стандартам (калориметрический метод)

Стандарты представляют собой запаянные пробирки (этало- ны), в которых помещена похожая на сперму жидкость (взвесь ба- рия в растворе желатина). Содержимое каждой пробирки по своему виду соответствует сперме с различной концентрацией спермиев: 10–50–100–200–300–500 млн спермиев в 1 мл (рисунок 44).

Концентрацию спермиев по стандартам определяют так: ис- следуемую сперму наливают в пустую пробирку такого же диамет- ра, как и стандарты и сравнивают с ними. Предварительно стан- дартные пробирки хорошо встряхивают, чтобы осевшие частицы равномерно распределились. Пробирки просматривают на свет, подбирая стандарт, близкий по про-
зрачности к определяемому эякуля- ту. Указанная на стандартах кон- центрация принимается за концен- трацию исследуемой спермы.
Если исследуемая сперма не со- ответствует стандартам, а занимает промежуточное положение между

двумя соседними эталонами, то за концентрацию принимают среднее число между показателями этих двух пробирок. В случаях, когда концен-
Рисунок 44 – Оптические стандарты для определения концентрации

трация бывает свыше 500 млн в 1 мл, берут 1 мл спермы, разбав- ляют в два раза глюкозным разбавителем, определяют по эталонам концентрацию разбавленной спермы и умножают на 2.
Сперму жеребца допускают к разбавлению с концентрацией не ниже 75 млн спермиев в 1 мл.

0. Определение процента живых и мертвых спермиев

Объективный метод определения процента живых и мертвых спермиев впервые был предложен В. А. Морозовым. Он основан на том, что живые спермии, способные поступательно двигаться, не окрашиваются, в то время как мертвые и ослабленные (с колеба- тельным движением) спермии легко окрашиваются той же краской. Это объясняется тем, что живая клетка непроницаема для краски, а мертвая легко пропускает ее через оболочку внутрь.

Техника определения. На предметное стекло, хорошо вымытое, обезжиренное спиртом и эфиром и подогретое до 35 °С, наносится небольшая капля свежеполученной спермы и к ней добавляется та- кой же величины капля 5%-ного водного раствора эозина. Смесь перемешивается стеклянной палочкой в течение 1–2 с. Покровным стеклом делается тонкий мазок, который высушивается на воздухе и микроскопируется при увеличении в 400–600 раз.
Все операции нужно делать быстро, чтобы живые спермии не погибли прежде чем высохнет мазок.
Спермии, бывшие в момент окраски живыми, хорошо выде- ляются на розовом фоне своей белой неокрашенной головкой. Мертвые спермии окрашены в розовый цвет.
Высушенный мазок просматривают под микроскопом и под- считывают в нескольких полях зрения 500 спермиев с разделением их на окрашенные и неокрашенные. После этого вычисляют про- цент живых (неокрашенных) спермиев к общему числу подсчитан- ных по формуле:
Например, если подсчитано 450 живых и 50 мертвых спермиев, то доля живых составит 90 %, что соответствует 9 баллам активно- сти.

0.