Искусственное осеменение

Определение переживаемости спермиев

Метод определения выживаемости спермиев в часах и абсо- лютного показателя переживаемости вне организма при разных степенях разбавления спермы синтетической средой, характеризует ее жизнеспособность.

От переживаемости спермиев зависит их оплодотворяющая способность, срок хранения и особенно срок использования сохра- няемой спермы при определенных температурных условиях и сте- пени разбавления спермы. Чем дольше спермии остаются живыми вне организма, тем более продолжительный срок сохраняются они в половых путях самки, тем выше их оплодотворяющая способ- ность.
Берут 11 стерильных пронумерованных пробирок или флако- нов и помешают их в штатив. Во все пробирки за исключением первой, мерной пипеткой наливают по 0,5 мл глюкозо-желточного разбавителя (для соответствующего вида животных). Затем в первую и вторую пробирки наливают по 0,5 мл испытуемой нераз- бавленной спермы, которую предварительно оценивают на густоту, активность и концентрацию. Из пробирки № 2 после перемешива- ния набирают 0,5 мл смеси и переносят в пробирку № 3. Переме- шав содержимое третьей пробирки, переносят из нее 0,5 мл смеси в четвертую пробирку и т. д. до пробирки № 11. Из последней про- бирки 0,5 мл смеси выливают. В первой пробирке для контроля сперму оставляют неразбавленной, в остальных последовательно она разбавлена в 2, 4, 16, 32, 64, 128, 256, 512 и 1024 раза.
Пробирки или флаконы, закрыв сухими стерильными пробка- ми вместе со штативом, помещают в термос с тающим льдом или в холодильник, отрегулированный при температуре около 0 °С (+1°,+2°).
Ежедневно сперму из каждой пробирки в одно и то же время исследуют на подвижность, пока не погибнут все спермии. Оценку проводят под микроскопом при температуре +38°…+40°, смешивая каплю спермы с каплей 3%-го раствора цитрата натрия.
Результаты исследований записывают в таблицу по прила- гаемой форме и затем вычисляют время выживаемости спермиев (в часах) и абсолютный показатель выживаемости.
Как видно из данного примера время выживаемости спермиев составляет 168 ч (таблица 5).
Продолжительность жизни спермиев при 0 °С в сперме барана и быка должна сохраняться 10–14 сут. Однако оплодотворяющую способность при данном режиме она теряет через трое суток.
Продолжительность жизни спермиев жеребца при 0 °С обычно колеблется от 36 до 72 ч; если менее 24 ч, то это указывает на их низкую оплодотворяющую способность.
Абсолютный показатель выживаемости вычисляют по форму-
ле:


S = ∑at,

где а – активность спермы;

t – показатель среднего отрезка времени между исследова-
ниями.
Для биоконтроля разбавителей выживаемость спермиев опре- деляют для каждой степени разбавления спермы. На основании этих данных можно определить наивысшую степень разбавления спермы. Сперма быка и барана может быть применена при актив- ности не менее 7 баллов.

Таблица 5 – Вычисление абсолютного показателя выживаемости спермы

Дата	Время начала проведения исследова- ния	Прошло времени от нача- ла опыта	Актив- ность спермиев в баллах	Отрезок времени в течение кото- рого наблюда- лась данная актив- ность	Произве- дение показате- лей актив- ности на время
5/IV	900	0	9	(8–0):2=4	36
5/ IV	1700	8	8	(24–0):2=12	96
6/IV	900	24	8	(46–8):2=20	160
7/IV	900	48	7	(72–24):2=24	168
8/IV	900	72	6	(96–48):2=24	144
9/IV	900	96	5	(120–72):2=24	120
10/IV	900	120	3	(144–96):2=24	72
11/V	900	144	1	(168–120):2=24	24
12/IV	900	168	Н	(168–144):2=12	0

Такие исследования спермы проводят периодически (1 раз в 3 мес или чаще в случае понижения оплодотворяемости маток или использовании новой серии компонентов разбавителей).
При оптимальной степени разбавления сперма быка и барана должна иметь абсолютный показатель выживаемости спермиев не ниже 1400, сперма хряка – 900, жеребца – не ниже 400.
В текущей работе племпредприятиятий переживаемость спер- мы быков через сутки после замораживания определяют ускорен- ным методом. Гранулу оттаянной спермы, взятой выборочно от каждого эякулята, помещают в термостат при температуре
+38°…+40 °С на 5 ч, а затем проверяют под микроскопом. Если прямолинейно-поступательное движение спермиев полностью пре- кращается, то аналогичное исследование повторяют через сутки. При повторном отрицательном результате сперма хранению не подлежит, ее бракуют.

0.