Искусственное осеменение

Санитарная оценка спермы

С целью контроля за санитарным состоянием спермы произво- дителей проводится исследование на общую бактериальную за- грязненность и коли-титр.

При взятии проб спермы необходимо предупреждать их заг- рязнение посторонней микрофлорой. В этих целях пробы спермы берут в стерильном боксе при помощи стерильной стеклянной пи- петки, переносят в сухой стакан или пробирку в объеме не менее 2 мл и плотно закрывают пробкой. На флакон наклеивают этикетку с указанием номера производителя и клички. Флаконы обертывают ватой и ставят в термос со льдом. К каждой пробе спермы, направ- ленной в лабораторию, должен быть приложен сопроводительный документ.
С момента взятия проб до начала исследования допускается их хранение не более 6 ч при +2°…+4° С и не более 2 ч при более вы- сокой температуре. Замороженную сперму транспортируют в ла- бораторию в термосе с жидким азотом.
Исследование на наличие общей микробной загрязненности спермы: для определения количества микробов в сперме, ее пред- варительно разбавляют стерильным физиологическим раствором в отношении 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000. Из проб в
разведении в 1000 раз и более высевают определенное количество раствора (не более 1 мл) на 1,5–2%-й МПА с добавлением 1%-ной глюкозы. Материал равномерно распределяют по поверхности МПА и чашки помещают в термостат при температуре 37,5 °С в течение 48 ч. Затем определяют микробное число по количеству выросших колоний, для чего чашку помещают вверх дном на чер- ный лист бумаги. Подсчитанные колонии отмечают восковым ка- рандашом. При обильном росте колоний чашку разделяют на сек- торы (2, 4, 8, 16) и подсчитывают с помощью лупы в каждом сек- торе, а затем полученные числа складывают.
Количество микробных тел в 1 мл вычисляют по формуле:
К  Р
^{М } ,
О  П

где М – количество микробных тел в 1 мл;

К – количество подсчитанных колоний
Р – степень разведения исследуемого материала;
О – объем раствора, взятого для посева;
П – площадь чашки, в которой произведен подсчет коло-
ний.
Пример. Было высеяно 0,5 мл разбавленной 1:1000 спермы. Подсчет колоний произведен на всей площади чашки, насчитано 30 колоний.
В этом случае в 1 мл содержится 60 000 микробных тел.

.
30  1000
 
0 ,5  1

В зависимости от содержания микробов различают сперму:

• 
  незначительно загрязненную – при содержании в 1 мл спер- мы до 0,1 тыс. микробов;
  
• 
  слабозагрязненную – до 2 тыс. микробов в 1 мл;
  
• 
  среднезагрязненную – до 5 тыс. микробов в 1 мл;
  
• 
  сильнозагрязненную – более 5 тыс. микробов в 1 мл.
  

Допускают неразбавленную сперму с содержанием не более 5 тыс. микробов в 1 мл. Разбавленная сперма допускается с содержа- нием не более 500 микробных тел в 1 мл.
При исследовании спермы на наличие синегнойной палочки посев пробы на МПА помещают в термостат на 6–7 суток и прове- ряют каждые 1–2 дн. При наличии
роста данных микробов выделяе- мый ими пигмент пиоцеанин посте- пенно окрашивает среду в зеленова- то-голубой цвет. Сперма не должна содержать патогенных и условно- патогенных микробов (рисунок 46).
Для исследования спермы на
наличие анаэробной микрофлоры или грибов посевы делают на специальные среды и применяют особый режим культивирования.
Исследование коли-титра спермы: для определения степени загрязнения спермы микробами из группы кишечной палочки пользуются методом бродильных проб путем высева спермы в раз- ведениях 1:10, 1:100, 1:1000 на среду Булиржа (к 1 л нейтрального мясопептонного бульона добавляют 2,5 г маннита и водный рас- твор нейтрального красного (до вишнево-красного цвета), встав- ляют поплавки и стерилизуют l5 мин при 170 °С. (Среду заливают в пробирки по 5 мл. Среду можно готовить и без краски.)
Пробирки с посевами инкубируют при +43°…+44 °С в течение 24 ч. О размножении в среде кишечной палочки судят по измене- нию цвета среды от вишнево-красного до желтого, помутнению и газообразованию. За титр кишечной палочки принимают тот объем спермы, который вызвал брожение в пробирке с небольшим разве- дением.
Коли-титр – это наименьший объем исследуемого материала, в котором обнаружена одна кишечная палочка.
Коли-индекс – это число бактерий кишечной палочки в 1 мл среды.
Неразбавленная сперма по санитарным требованиям должна иметь коли-титр не выше 0,1, коли-индекс – не больше 10. Разбав- ленная и сохраненная сперма должна иметь отрицательный коли- титр.

0.