Molekulyar koloniyalar usuli (PCR ning jel, ingliz koloni - PCR koloni) - PCR ning barcha komponentlari bilan akrilamid jel polimerizatsiyasi va PCRni amalga oshirish. Tahlil qilinayotgan DNKni o'z ichiga olgan nuqtalarda molekulyar koloniyalar paydo bo'lishi bilan amplifikatsiya sodir bo'ladi.
PCR, cDNA uchlari tezda kuchaytiriladi (tug'ilganda cDNA uchlari tez sur'atda, RACE-PCR tug'iladi).
Uzoq qismli PCR (Uz. Uzoq masofali PCR) - kengaytirilgan DNKning hududlarini (10 ming yoki undan ortiq bazalarni) kuchaytirish uchun PCR modifikatsiyasi. Ikki polimeraz aralashmasidan foydalaning, ulardan biri - Taq(yuqorida qayd etilgan DNKning uzun bir zanjirini sintez qilish qobiliyatiga ega) yuqori ishtiyoqli polimeraza va ikkinchisi 3'-5'-eksonukleazli faollik bilan, odatda polimeraza Pfu. Ikkinchi polimeraza birinchi bo'lib kiritilgan xatolarni tuzatish uchun kerak Taq-polimeraza qo'shimcha nukleotit qo'shilsa DNK sintezini to'xtatadi. Ushbu qo'shimcha bo'lmagan nukleotid Pfu polimerazini yo'q qiladi. Polimerazlarning aralashmasi 50: 1 nisbatda yoki hatto 100: 1 dan kamroqda olinadi Taq-polimeraza 25-100 marta ko'proq olinadi Pfupolimerlar.
Rapd (Polimorfik DNKning tasodifiy kuchaytirilishi), polimorfik DNKning tasodifiy kuchaytirilishi bilan PCR - organizmlarni genetik tartibda o'xshashligini aniqlashda, masalan, ekinlar o'simliklarining turli navlarini, it jinslarini yoki ular bilan yaqindan bog'liq mikroorganizmlarni ajratib olish zarur bo'lganda. Ushbu usulda odatda bir kichik primer (taxminan 10 bp) ishlatiladi. Ushbu astar o'rganilgan organizmlarning tasodifiy DNK mintaqalarini qisman to'ldiradi. Shartlarni tanlab (primer uzunligi, tarkibi, harorati va boshqalar), ikkala organizm uchun PCR modelida qoniqarli farqga erishish mumkin.
Do'stlaringiz bilan baham: |