M. G. Safin, B. S. Alikulov, F. A. Ruziev

Harorat  ta`sirida  ishlov  berish.  Cho`kma  tarkibida  3  mM  EDTA    va  1  mM  beta-

merkaptoetanol  bo`lgan  (pH  –  7,0)  0,05  M  natriy  fosfatli  bufer  eritmasini  qo`shib, 

oqsilning  konsentratsiyasi  40  mg/ml  darajasiga  yetkazishni  e`tiborga  olib  eritiladi. 

Eritma  atsetonning  qoldiqlaridan  xolis  bo`lish  uchun  25 

0

C  da  12  soat  davomida 

magnitli  aralashtirgich  yordamida  aralashtiriladi.  Aralashmaning  hajmi  shu  bufer 

eritmani    qo`shish  asosida  30  ml  ga  yetkaziladi  va  uni  10  minut  davomida 

ko`piklatmasdan  asta  aralashtirib  suv  hammomida  51 

0

C  gacha  isitiladi.  Shu  holatda  

aralashma  yana  30  minunt  saqlanadi.  Hosil  bo`lgan  cho`kma  15400 g/min tezlikda 15 

minut  sentrifugalash  yo`li  bilan  cho`ktirib  olib  tashlanadi.  Supernatantda  oqsilning 

konsentratsiyasi  aniqlanadi. 

Gelfiltratsiya.  Tarkibida  100  mg  oqsili  bo`lgan  oqsilli  eritma  (supernatant)  sefadeks 

G-100  to`ldirilgan  tarkibida  3  mM EDTA va 1 mM beta-merkaptoetanol bo`lgan 0,05 

M  tris-HCl  bilan  muvozanatlangan  kolonka  (2x60  sm  li)  dan  o`tkaziladi. 

Supernatantning  qolgan  qismi  saqlash  uchun  olib  qo`yiladi  va  uni  kolonkani  o`zidan 

takror  va  takror  gelfiltratsiya  qilish  uchun  foydalanish  mumkin.  Elyutsiya  shu 

yuqoridagi  bufer  eritmasi  yordamida  amalga  oshiriladi.  Faollik  ko`rsatkichi  eng 

yuqori  (1000  va  undan  yuqori)  bo`lgan  fraksiyalar  birlashtiriladi.  Nisbiy  faollik 

---

 

- 45 - 

birligi 

sifatida 

1 

mk 

mol 

glitseraldegid-3-fosfatni 

1 

minut 

davomida 

fosfodioksiatsetonga  aylanishiga  oid  ko`rsatkich  qabul  qilinadi.  Birlashtirilgan 

fraksiyalar  gelfiltratsiyada  foydalanilgan  va  oldindan  ammoniy  sulfat  bilan 

to`yintirilgan  tris  bufer  eritmasiga  qarshi  dializlanadi.  Hosil  bo`lgan  cho`kma  oqsil  20 

minut  davomida 15900 g/min  tezlikda  sentrifugalanadi.