Mesobuthus eupeus chayon zaxrining quyi molekulyar biologic faol fraksiyalarini o’rganish

2.1.3 Mass-spektrometriya
Peptid molekulyar og'irliklari chiziqli va refleks rejimlarda ijobiy ionlarni aniqlash bilan Ultraflex TOF-TOF massa spektrometrida matritsa yordamida lazerli desorbsiya/ionizatsiya (MALDI) massa spektrometriyasi yordamida o'lchandi. Matritsa sifatida 2,5-dihidroksibenzoy kislotasi (C1 eritmasi) yoki a-siyano-4-gidroksisinnamik kislota (C2 eritmasi) ishlatilgan. Teng hajmdagi (har biri 1 mkl) namunalar va matritsa eritmasi nishonga aralashtiriladi va havoda quritiladi. Natijalar Data Analysis 4.3 va Data Analysis Viewer 4.3 dasturlari yordamida qayta ishlandi.



2.1.4 Polipeptidlar konsentratsiyasini aniqlash. UV spektrofotometriyasi
UV soxasidagi moddalarning yutilish spektrlarini olish uchun ular muzlatilgan holda quritilgan va keyin 0,5 ml suvda eritilgan bolishi kerak. Biz UV-1800 spektrofotometridan foydalandik; optik yo'l uzunligi 1 sm edi; toza suv standart eritmasi sifatida xizmat qildi.
Peptidlarning kontsentratsiyasi yutilish spektridan aniqlandi. Formula (1) triptofan o'z ichiga olgan, formula (2) tirozin o'z ichiga olgan va formula (3) fenilalanin o'z ichiga olgan polipeptidlar uchun ma'lum aminokislotalar ketma-ketligi bilan ishlatilgan. Formula (4) aromatik aminokislotalar qoldiqlari bo'lmagan polipeptidlarning kontsentratsiyasini hisoblash uchun ishlatilgan. Floresan oqsili va polipeptid toksinini o'z ichiga olgan kimerik molekula uchun kontsentratsiya (5) formulasi yordamida floresan yutish cho'qqisidan hisoblab chiqilgan.
CA = (A280 – A320) /  280 (1),
CA = (A274,5 – A320) /274,5 (2),
CA= (A257,4 – A320) / 257,4 (3),
CP = (A214 – A320) /214 (4),
CF = (A489 – A320) / e (5),
ProtParam dasturi yordamida ma'lum aminokislotalar ketma-ketligiga ega peptidlar uchun 257,4, 274,5, 280 nm molyar yutilish koeffitsientining hisoblangan qiymatlari olingan. 214 nm da molyar assimilyatsiya koeffitsientining qiymatlari formuladan foydalanib hisoblab chiqilgan
214 = _p*n_p+∑(_a*n_a)