Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Характеристика клонирующих векторов. Полученный тем или 
иным способом ген может обусловить синтез соответствующего про-
дукта только в клетке, при условии, что он будет экспрессироваться. 
Кроме того, ген должен иметь возможность реплицироваться для того, 
чтобы все клетки в популяции имели его в своем составе и образовы-
вали необходимое количество продукта. Все эти условия (введение 
генов в клетки, их репликация, транскрипция и трансляция) обеспечи-
ваются с помощью векторных ДНК (векторов). 
Векторами называют небольшие автономно реплицирующиеся 
молекулы ДНК, в частности плазмиды, ДНК фагов или других виру-
сов, либо их модификации, обеспечивающие проникновение в клетку 
и стабильное наследование чужеродной ДНК (генов). Векторные реп-
ликоны должны отвечать ряду требований: содержать ori репликации 
и автономно реплицироваться; стабильно наследоваться клеткой хо-
зяина; содержаться в большом числе копий в клетке; обладать доста-
точной емкостью, позволяющей клонировать в их составе крупные 
гены; содержать «удобные» сайты рестрикции; содержать маркеры, по 
которым можно вести прямой отбор клеток, воспринявших клониро-
ванный сегмент ДНК и сам вектор; обладать широким кругом хозяев. 
Нуклеаза S1 (расщепляет
однонитевые участки) 
+ ДНК-полимераза І
Шпилька
+ Набор дезоксирибо- 
нуклеотидов + ревертаза 
Шлейф 

---

90 
Поскольку плазмиды, как и вирусы, на основе которых конструи-
руют векторы для клонирования, неизбежно обладают специфично-
стью к видам организмов, в которых способны реплицироваться, при 
создании векторов следует учитывать, в каких клетках хозяина будет 
осуществляться клонирование. Из большого количества систем «век-
тор – хозяин», разработанных к настоящему времени, наибольшее рас-
пространение имеют те из них, где в роли хозяина выступают бакте-
рии E. coli, а в роли вектора – плазмиды или фаги кишечной палочки. 
Следует отметить, что обеспокоенность ученых в отношении непред-
сказуемых результатов клонирования эукариотических генов стиму-
лировала поиск и создание ослабленных штаммов бактерий-хозяев. 
В частности, были получены «безопасные» штаммы E. coli К 12, отли-
чающиеся рядом особенностей, исключающих «утечку» из лаборато-
рии: потребность в особых факторах роста, отсутствующих в природ-
ных экологических нишах, хрупкая клеточная стенка, чувствительная 
к слабогипотоническим средам и др.