5–ISH. OVALBUMINNING GOMOGYENLIGINI, MOLEKULYAR MASSASINI VA KOAGULYASIYALANISH TEMPERATURASINI ANIQLASH. - Ishning umumiy izohi. Tuxum albumin namunasini («OV») ionlangan detergent (nutriy dodetsilsulfat DDS-Na) ishtirokida. Lemmli disk-bufer sistemasi yoki rN 8,0 bo’lgan 0,1 m natriy-fosfat buferini ishlatib, OVning marker oqsillarining elektroforetik yo’nalishiga nisbatan molekulyar massasi Mg aniqlanadi. Koagulyatsiyalanish temperaturasiga mochevinaning (8M) va DDS-Na (2%) ning ta‘siri aniqlanadi.
- Jihozlar va reaktivlar. To’rtta naychali elektroforez asbobi, probirkalar (4 dona), koagulyatsiyalanish temperaturasini aniqlash uchun bir tomoni kavsharlangan shisha naycha (d=0,3-0,4 sm, Н=10 sm), glitserinli yoki kislotali, termometr bilan jihozlangan suv hammomi, ovalbmin, odam qoni zardobi albumini (OQZA), karboangidraza (KA), RNK-aza (RA), lizotsim (L), 10% - lik DDS-Na, mochevina, sirka kislotasi, metanol (40 ml), izo-propanol (50 ml), TXU (25 g), kumasi R-250 ning izo-propanol – sirka kislota –N2O=12:10:78 dagi 0,1% - li eritmasi yoki qoraamid 10V ning yuqoridagi aralashmadagi 0,5% li eritmasi.
- Ishning borishi. Bu qo’llanmada PAAGda elektroforez usulini Osborning bir xil tarkibli buferlar sistemasini qo’llash keltirilgan. Kerak bo’lgan hollarda bir xil tarkibli bo’lmagan aralashma (disk-PAAGE) qo’llanilsa, uning borishini Maurar G., (Disk-elektroforez, 1971 y, 94-95 betlar) kitobidan topish mumkin.
- To’rtta bir xil shisha naychaga (d=0,5 sm, Н=10-12) monomer aralashmasi qo’yilmasdan avval 12% - li akrilamid (S=3,3%, T=12%), oxirgi kontsentratsiyasi 0,1 M, rN 8,0 bo’lgan natriy fosfat buferi, DDS- Na (0,1% gacha) va polimerlanish intsiatorlari TYeMYeD - aralashmaning har bir ml-ga 2-4 mkl, 10 mkl 5% - li ammoniy persulfat solinib, monomr aralashmasi bilan to’ldiriladi. Elektroforez naychalarini tagidan polietilen yoki rezina plyonka bilan berkitiladi va monomer aralashmasi solinadi. Hamma naychalar bir xil hajmda bo’lishiga erishish kerak (naycha tepasidan 0,5 – 1,0 sm bo’sh joy qoldiriladi), monomer aralashmasi ustiga kolonkaning yuqori qismi tekis bo’lishligi uchun asta-sekin taxminan 0,1 ml suv qo’yiladi. Polimerlanish xona temperaturasida 20-30 min ichid tugaydi, buni gel bilan suv oralig’idagi keskin chegara hosil bo’lishidan aniqlash mumkin. PAAG solingan naycha tagidagi plyonka olib tashlangandan so’ng, yuqoridagi rezervuarga mahkamlanib, rN 8,0 bo’lgan 0,1 M natriy fosfat buferi hamda 0,1% - li DDS- Na qo’yiladi. Marker oqsili namnasi va OV 5 mg/ml kontsentratsiyada quyidagi tarkibdagi bufer eritmada eritiladi: 0,1 M gacha Na fosfat buferi, 2,3% gacha DDS- Na, 7% gacha glitserin, 0,01% gacha reper bo’yog’i – bromfenol ko’ki.
Do'stlaringiz bilan baham: |
