6- ISH. ODAM QON ZARDOBI ALBUMINI VA OV ALBUMINNI DKAK-TSYELLYULOZADA QON ALMASHINISH XROMATOGRAFIYASI BILAN TOZALASH. - Ishning umumiy izohi. Odam qoni zardobi albuminining (OZA) va tuxum albuminining (OV) tozalanmagan namunasi rN 7 bo’lgan 20 mM natriy fosfat buferida DYeAYe-tsellyuloza anionalmashgichda ion almashish xromatografiyasiga qo’yiladi. Albuminlar kolonkadan 0,05:0,1: 0,3 va 0,6 M NaC1 bilan bosqichma-bosqich elyuatsiya qilinib, so’ngra dializ qilinadi va liofillar quritiladi.
- Jihozlar va reaktivlar. Kolonka (2x20 sm), polietilen yoki rezinadan yasalgan d=0,1-0,2 sm, uzunligi 1-2 m bo’lgan birlashtiruvchi paychalar, DYeAYe ni tsyuloza (sefadeks) –20-40 ml bo’ktirilgan gel. RN 7,4 bo’lgan natriy fosfat buferi, SF-26, 300 ml tagi yassi kolbalar 4 dona, 1 l kolba –1 dona, dializ trubkalari, OZA-200 mg, OV –200 mg.
- Ishning borishi. Kolonkaa yuvilgan, regeneratsiya (qayta tozalangan) qilinib o’z holatiga anion almashgich ishlash uchun tayyorlangan bufer bilan birga to’ldiriladi (namlash usuli bilan, gelda pufakchalar hosil bo’lishidan holi holda) va tutashtiruvchi naychalar yordamida 100 mg oqsil/10 ml gel hisobida oqsil eritmasi solinadi, kolonkani 5 barobar hajmdagi 20 mM natriy fosfat buferi bilan yuviladi. Gel bilan bog’langan oqsillar ketma-ket 0,05; 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl tutuvchi buferda elyutsiya qilinadi. Elyutsiya har bir bufer bilan elyuatning A3 4 0 ni nolga teng kelguncha olib boriladi. 0,05 M NaCl dagi elyuat tashlab yuboriladi, 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl dagi alyuatlar dializlanib tarkibini ifodalash uchun foydalaniladi, OZA (SACH) va OV asosan 0,3 M NaCl bilan elyutsiya qilinib, 2 marotaba 1-2 soatda 20 mM natriy fosfat buferi va bir marotaba suv bilan dializ qilinadi. Dializat liofil holatda quritiladi va oqsilni keyingi ifodasi uchun foydalaniladi.
- Ishning umumiy izohi. Odam qoni zardobi albuminining (OZA) va tuxum albuminining (OV) tozalanmagan namunasi rN 7 bo’lgan 20 mM natriy fosfat buferida DYeAYe-tsellyuloza anionalmashgichda ion almashish xromatografiyasiga qo’yiladi. Albuminlar kolonkadan 0,05:0,1: 0,3 va 0,6 M NaC1 bilan bosqichma-bosqich elyuatsiya qilinib, so’ngra dializ qilinadi va liofillar quritiladi.
- Jihozlar va reaktivlar. Kolonka (2x20 sm), polietilen yoki rezinadan yasalgan d=0,1-0,2 sm, uzunligi 1-2 m bo’lgan birlashtiruvchi paychalar, DYeAYe ni tsyuloza (sefadeks) –20-40 ml bo’ktirilgan gel. RN 7,4 bo’lgan natriy fosfat buferi, SF-26, 300 ml tagi yassi kolbalar 4 dona, 1 l kolba –1 dona, dializ trubkalari, OZA-200 mg, OV –200 mg.
- Ishning borishi. Kolonkaa yuvilgan, regeneratsiya (qayta tozalangan) qilinib o’z holatiga anion almashgich ishlash uchun tayyorlangan bufer bilan birga to’ldiriladi (namlash usuli bilan, gelda pufakchalar hosil bo’lishidan holi holda) va tutashtiruvchi naychalar yordamida 100 mg oqsil/10 ml gel hisobida oqsil eritmasi solinadi, kolonkani 5 barobar hajmdagi 20 mM natriy fosfat buferi bilan yuviladi. Gel bilan bog’langan oqsillar ketma-ket 0,05; 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl tutuvchi buferda elyutsiya qilinadi. Elyutsiya har bir bufer bilan elyuatning A3 4 0 ni nolga teng kelguncha olib boriladi. 0,05 M NaCl dagi elyuat tashlab yuboriladi, 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl dagi alyuatlar dializlanib tarkibini ifodalash uchun foydalaniladi, OZA (SACH) va OV asosan 0,3 M NaCl bilan elyutsiya qilinib, 2 marotaba 1-2 soatda 20 mM natriy fosfat buferi va bir marotaba suv bilan dializ qilinadi. Dializat liofil holatda quritiladi va oqsilni keyingi ifodasi uchun foydalaniladi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
