O’zbekiston Respublikasi Oliy ta’lim, Fan va innovattsiyalar Vazirligi Mirzo Ulug’bek nomidagi

2.5 . Mikrozarrachalar yordamida ajratib olish
Protein ekstraktsiyasi tajribalari hujayra bulonidan olingan alikotlar yoki hujayralar to'plangan va 23 ° C da buferda qayta to'xtatilgan holda amalga oshirildi . Har bir partiyaning haqiqiy konsentratsiyasi 50 ml suspenziyalarni 4000 × g da 10 daqiqa davomida 23 ° C da santrifüj qilish va keyin nam hujayra granulalarini tortish yo'li bilan aniqlandi . Har xil hujayra va tuz konsentratsiyasi bilan tajribalar uchun granulalar tegishli tamponlarda vortekslash orqali to'xtatildi. _{Hujayralar, mikropartikullar, tamponlar va tuzning yakuniy konsentratsiyasi 50% (v/v) suspenziyalarga 10 × bufer zahiralarini qo'shish va ddH 2} O bilan 20 ml yakuniy ish hajmiga suyultirish orqali o'rnatildi. Kuluçkalar aralashtiriladigan stakanlarda yoki statik naychalarda 23 ° C da 3 soatgacha amalga oshirildi . Stakanlar va naychalarning balandligi va diametri nisbati bir xil edi (taxminan 3:5 sm). Aralashtirilgan inkubatsiyalar uchun aralashtirish intensivligi 0,3 sm × 1 sm magnit aralashtirgich bilan 800 rpm ga o'rnatildi . 1 ml lik alikvotlar 1:2 nisbatda bo'shatilgan oqsillarni miqdorini aniqlash uchun tegishli elyusiya tamponlari bilan suyultirildi. Keyin namunalar F45-24-11 rotorli (Eppendorf, Gamburg, Germaniyadan) 5415R santrifüjda 1 minut davomida 8000 × g da 23 ° C da 2 ml naychalarda santrifüj qilindi . Nihoyat, supernatantlar keyingi tadqiqotlar uchun toza namunali naychalarga yig'ildi.
2.6 . Atom kuch mikroskopiyasi
Ijobiy zaryadlangan mikroskopik slaydlar (Superfrost Ultra Plus; Thermo Fisher Scientific) ketma-ket 50 mM saxaroza eritmasi, deionlangan suv va mikrozarrachalarning 1% (v/v) suyultirilgan suspenziyasi bilan ishlov berildi. Quritish har bir bosqichdan keyin 65 ° C da 24 soat davomida amalga oshirildi .
Hujayra vizualizatsiyasidan tashqari barcha AFM o'lchovlari JPK NanoWizard I atom kuch mikroskopi (JPK Instruments AG, Berlin, Germaniya) bilan quruq aloqa rejimida amalga oshirildi. Zarrachalarning topografiyasi NP-S10 o'tkazmaydigan kremniy nitridi uchlari (Bruker korporatsiyasi, Billerica, Massachusets, AQSh) bilan o'lchandi, ular nominal bahor konstantasi 0,12 N / m edi. Ochiq kodli dasturiy ta'minot Gwyddion (David Nečas va Petr Klapetek, Brno, Chexiya 2.3.5 versiyasi) va JPK Instruments ma'lumotlarini qayta ishlash dasturi sirt topografiyasini tahlil qilish va polinom tekislash tahlili uchun ishlatilgan.