O‘zbеkistоn rеspublikаsi

Цель работы: Ознакомить студентов с рецептурой питательных сред.

При составлении питательных сред для микроорганизмов необходимо учитывать их потребность в элементах питания. По составу питательные среды подразделяется на две группы: естественные (натуральные) и синтетические. Естественными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный химический состав.

Синтетические среды – это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях.
Синтетические среды следует готовить на дистиллированной воде. Для разработки синтетических сред, обеспечивающих нормальный рост изучаемого микроорганизма или максимальный биосинтез какого-либо продукта его жизнедеятельности, необходимо знать особенности обмена веществ данного организма, его потребности в источниках питания. В настоящее время в распоряжении микробиологов имеется достаточное количество синтетических сред, не уступающих по своим качествам сложным средам неизвестного состава.
Успех выделения новых и уже известных микроорганизмов, активных в окислении элементной серы, закисного железа, сульфидных минералов или в биосинтезе метаболитов в значительной степени зависит от используемых питательных сред. Ниже мы приводим рецептуру питательных сред для выделения и культивирования микроорганизмов, наиболее важных для биогеотехнологии металлов.
№1. Среда Летена для Т. Ferrooxidans и других железоокисляющих бактерий. (NH₄ ) ₂SO₄ 0,15 г, КС1 0,05 г, MgSO₄ · 7Н₂О, 0,5 г ; KH₂PO₄, 0,10 г; Са(NO₃)₂ ^. 4H₂O 0,01 г , H₂O дист N - 1 л.
К среде добавляют 10 мл 10% - нoго раствора FeSO₄ · 7Н₂О, подкисленного до рН 3,5, который стерилизуют отдельно фильтрованием через асбестовый фильтр. Стерилизацию раствора FeSO₄ · 7Н₂О можно проводить в . автоклаве при 0,5 атм., предварительно подкислив его Н₂SO₄ до рН 2,0 - 2,5. Конечный рН среды устанавливают 3,5.
№2. Среда Сильвермана и Люндгрена 9 К для Т.Ferrooxidans 1-й раствор в 700 мл дистиллированной воды растворяют (NH₄ )₂ SO₄ 3,0 г, КС1 0,1 г; MgSO₄ · 7Н₂О 0,5 г, K₂НРО₄ 0,5 г, Са(NO₃)₂, 0,01г.
2-й раствор в 300 мл дистиллированной воды растворяют FeSO₄ · 7Н₂О 44,2 г, добавляют 1 мл 10н серной кислоты. Вместо FeSO₄ · 7Н₂О можно брать соль Мора [Fe₌SO₄ (NH₄ ) ₂SO₄ · 6H₂O].
В этом случае (NH₄ )₂SO₄ к раствору не добавляется, а 2-й раствор готовится следующим образом: в 300 мл дистиллированной воды растворяют [FeSO₄(NH₄)₂SO₄6H₂O] и добавляют 1 мл 10н серной кислоты. Такое количество соли Мора соответствует 9 г/л железа и 21,4 г/л (NH₄) ₂SO_4. Растворы стерилизуют отдельно: 1-й раствор при 1 атм. и 2-й при 0,5 атм. Перед употреблением оба раствора смешивают. Эта среда является наиболее благоприятной для роста Т.Ferrooxidans и поэтому используется чаще другиx . №3 Среда Маннинга для железоокисляющих бактерий.
Раствор A. FeSO₄ · 7Н₂О (33,4 г/л) растворяют в 300 мл воды, доведенной до рН 2,5 6М Н₂SO₄ и стерилизуют фильтрованием.
Раствор Б (NH₄)₂SO₄ 6,0 г,; KCI 0,2 г; MgSO₄· 7Н₂О 1,0 г; Ca(NO₃)₂ 0,02г; Н₂О дист. - 550 мл, рН 3,0. Раствор стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 15 мин.
Раствор B. Очищенный агар –L 28, 7,0 г добавляют к 150 мл дистиллированной воды, выдерживают в течение 15 мин. и автоклавируют при 121°С в течение 15 мин.
Растворы Б и В охлаждают в течение 15 мин. при комнатной температуре и сливают при перемешивании. Затем добавляют раствор А и перемешивают. Готовую среду разливают в чашки Петри.