Rajabov Tolibning

9. Hayvonlar hujayralari uchun hujayralarni qurish texnikasi. Gibrid texnologiyasi va undan biotexnologik jarayonlarda foydalanish.
1975 yilda G. Köhler va K. Milshteyn birinchi bo'lib antikor molekulasining faqat bitta turini sekretsiya qiladigan va shu bilan birga madaniyatda o'sishga qodir hujayra klonlarini ajratib olishgan. Ushbu hujayra klonlari antikor hosil qiluvchi va o'simta hujayralari - gibridomalar deb ataladigan kimyoviy hujayralar, bir tomondan, madaniyatda deyarli cheksiz o'sish qobiliyatini, boshqa tomondan ma'lum bir o'ziga xos antikorlarni (monoklonal antikorlarni) ishlab chiqarish qobiliyatini meros qilib olishdi. .
Tanlangan klonlarni muzlatilgan holatda uzoq vaqt saqlash mumkinligi biotexnolog uchun juda muhimdir, shuning uchun kerak bo'lganda siz bunday klonning ma'lum dozasini olib, uni hayvonga tanishtirishingiz mumkin, bu ma'lum bir o'ziga xos monoklonal antikorlarni ishlab chiqaradigan o'smani rivojlantiradi. Tez orada hayvonlarning zardobida juda yuqori kontsentratsiyadagi 10-30 mg / ml antijismlar aniqlanadi. Bunday klonning hujayralari ham in vitroda o'stirilishi mumkin va ular tomonidan ishlab chiqarilgan antikorlarni madaniyat suyuqligidan olish mumkin.
Muzlatilgan holatda saqlanishi mumkin bo'lgan gibridomalar (kriopreservatsiya) butun gibridoma banklarini tashkil etish imkonini berdi, bu esa o'z navbatida monoklonal antikorlardan foydalanish uchun katta istiqbollarni ochib berdi. Turli moddalarni miqdoriy aniqlashdan tashqari, ularni qo'llash doirasi turli xil diagnostika usullarini o'z ichiga oladi, masalan, ma'lum bir gormon, virusli yoki bakterial antijenlarni, qon guruhi antijenlarini va to'qima antijenlarini aniqlash. Gibrid hujayralarni olish bosqichlari. Hujayra sintezidan oldin plazma membranalari o'rtasida yaqin aloqa o'rnatiladi. Bunga oqsillar va lipidlarning salbiy zaryadlangan guruhlari tufayli tabiiy membranalarda sirt zaryadining mavjudligi oldini oladi. Muqobil elektr yoki magnit maydon yordamida membranalarning depolyarizatsiyasi, kationlar yordamida membranalarning salbiy zaryadlanishini neytrallashtirish hujayra sinteziga yordam beradi. Amalda ular Ca2 + ionlari, xlorpromazin tomonidan keng qo'llaniladi. Samarali "drenajlovchi" (fusogenik) agent polietilen glikoldir.
Sendai virusi hayvonlar hujayralariga nisbatan ham qo'llaniladi, ularning harakatlanish elementi sitoplazmatik membrana oqsillarining qisman gidrolizlanishi bilan bog'liqdir. FI virusi bo'linmasining itnasi proteolitik ta'sirga ega (C. Nicolau va boshqalar, 1984). O'simlik, qo'ziqorin va bakterial hujayralar termoyadroviy oldin hujayra devoridan chiqariladi, natijada protoplastlar paydo bo'ladi. Hujayra devori lizozim (bakterial hujayralar uchun), koxlear zimoliaz (qo'ziqorin hujayralari uchun), zamburug'lar (o'simlik hujayralari uchun) tomonidan ishlab chiqarilgan cillulazalar, gemitselulazalar va pektinazalar yordamida enzimatik gidrolizga uchraydi. Protoplastlarning shishishi va keyinchalik yo'q qilinishiga muhitning osmolyarligi oshishi sabab bo'ladi. Protoplastlarning maksimal hosil bo'lishini ta'minlash uchun gidrolitik fermentlarni tanlash va muhitdagi tuzlarning kontsentratsiyasi har bir holatda alohida hal qilinadigan murakkab vazifadir.
Olingan gibrid hujayralarni skriningi uchun turli xil yondashuvlar qo'llaniladi: 1) fenotipik belgilarni hisobga olish; 2) tanlab olinadigan sharoitlarni yaratish, bunda faqat ota-ona hujayralarining genomlarini birlashtiradigan duragaylar saqlanib qoladi.