Стерильные и асептически

разделения и фракционирования растворов, при котором макромолекулы 
(с М. м. от 1 тыс. до 1 млн.) отделяются от раствора и низкомолекулярных 
соединений фильтрацией через мембраны. Установлено, что при ультра-
фильтрации через ацетилцеллюлозный мембранный фильтр «Владипор» 
УАМ-100 со средним диаметром пор 100:25 А задерживается более 99% 
липополисахаридов, обусловливающих пирогенность. С применением 
ультрафильтрации получены апирогенные растворы глюкозы, аминокис-
лот и др. 
3.4. Методы определения пирогенов в лекарственных средствах 
Ввиду значительной сложности предохранения лекарственных 
средств от микробной контаминации и большой опасности пирогенной ре-
акции, фармакопеями многих стран мира, в том числе в нашей стране пре-
дусмотрена проверка воды для инъекций, лекарственных форм для инъек-
ций и ряда лекарственных веществ на пирогенность. Особенно важно про-
верить препараты, получаемые из природного сырья (антибиотики, фер-
менты, экстракты из печени, препараты крови, лизаты белков и т. п.). Тре-
буют также проверки пирогенности вода и другие жидкости, используемые 
для промывания флаконов, ампул, приборов для инфузий, изделий из стек-
ла, пластмассы и резины, в которых содержатся или с которыми соприка-
саются препараты для вливания; шприцы одноразового использования; 
пластмассы и резины, применяемые при изготовлении растворов для инъ-
екций. Согласно ГФ X испытание пирогенности проводят на здоровых 
кроликах обоего пола массой 2 – 3,5 кг, содержащихся в строго регламен-
тированных условиях и имеющих исходную ректальную температуру от 
38,5°С до 39,5°С. Испытание каждого раствора проводят на 3 кроликах, 
измеряя ректальную температуру 3 раза с промежутками 1 ч. Воду для 
инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенным, 
если сумма повышений температуры у трех кроликов меньше или равна 
1,4°С. Если эта сумма превышает 2,2°С, то воду для инъекций или раствор 
лекарственного средства считают пирогенным.
Данный метод имеет ряд существенных недостатков: необходимость 
содержать большое количество подопытных животных в строго регламен-
тированных условиях, значительные колебания чувствительности кроли-
ков к пирогенам, отсутствие количественной характеристики пирогенной 
реакции, высокая стоимость анализа. По многим причинам он практически 
неосуществим в условиях даже самых крупных аптек, где в настоящее 

---

22 
время готовится подавляющее количество инфузионных растворов, кото-
рые вводятся больным без предварительного испытания на пирогенность. 
Широкое распространение за рубежом получил в последнее десяти-
летие метод определения пирогенности с помощью реакции гелирования 
лизата амебоцитов (РГЛА), называемый также ЛАЛ-тест или Limulus-тест. 
Метод основан на способности лизированных клеток (амебоцитов) крови 
Limulus poliphemus реагировать с бактериальными пирогенными эндоток-
синами, образуя гель. 
Лимулус-тест проводят, смешивая в асептических условиях в про-
бирке 0,1 мл испытуемого раствора с 0,1 мл ЛАЛ. Смесь инкубируют при 
37°С в течение от 15 до 90 мин при рН от 6,0 до 8,0, не подвергая ее встря-
хиванию. При наличии пирогенных эндотоксинов грамотрицательных бак-
терий образуется гель, который обнаруживается, по увеличению вязкости 
смеси, потере ею текучести. При повороте пробирки на 180° гель не дол-
жен разрушаться. 
Лимулус-тест уже в 1980 г. включен в XX фармакопею США наряду 
с тестом на кроликах. Его преимуществом является высокая чувствитель-
ность, позволяющая в определенных условиях обнаруживать до 1 мг эндо-
токсина. Метод в 5 – 10 раз чувствительнее, чем тест на кроликах. Он лег-
ко воспроизводится, надежен и экономичен. Тест широко используется для 
контроля пирогенности воды, требуя для проведения от 20 до 90 мин, хо-
рошо коррелирует с тестом на кроликах. Применение этого метода позво-
ляет очень быстро и своевременно, до использования раствора в клинике, 
получить результаты анализа на их пирогенность.