Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

НОГО АЗОТА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПО МЕТОДУ 
АССЕЛЯ 
Цель работы: научиться определять небелковый азот сыворотки крови. 
Знать содержание остаточного азота в сыворотке крови в норме и возмож-
ные причины отклонений. 
Принцип метода колометрического определения остаточного азота с 
реактивом Несслера основан на цветной реакции между аммиаком, обра-
зующимся при сжигания безбелкового фильтрата крови, и реактивом 
Несслера с образованием продуктов желто-оранжевого цвета. 
Работа проводится в три этапа: 
1. Осаждение белков и получение безбелкового фильтрата крови. 
2. Минерализация безбелкового фильтрата крови. 
3. Колориметрическое определение остаточного азота. 
Порядок выполнения работы: 
I. Осаждение белков. Отмерить в центрифужную пробирку 3 мл 
осадителя белков (ТХУК), микропипеткой из пальца взять 0,2 мл крови (с 
соблюдением всех правил асептики), или отмерить 4 капли цитратной 
крови и перенести ее в центрифужную пробирку с осадителем. Микропи-
петку тщательно промыть цитратом. Жидкость перемешать, через 10 минут 
отцентрифуговать в течение 5 минут при 3000 оборотов. Осторожно, не за-
мутив осадка, слить центрифугат в другую пробирку. 
II. Минерализация. Отмерить в 2 обыкновенные пробирки по 1 мл 
центрифугата (опыт), а в 2 другие по 1 мл дистиллированной воды (кон-
троль). В каждую пробирку добавить по 3 капли концентрирован-
ной серной кислоты и выпарить на песчаной бане до обесцвечивания жид-
кости. Для ускорения процесса сжигания можно добавить 2-3 капли пер-
гидроля (осторожно, пробирку держать от себя!). 
III. Титрование. После сжигания добавить во все пробирки по 7 мл 
дистиллированной воды, по 3 мл 10% NаОН и 10 капель реактива Несс-
лера. Жидкость в опытных пробирках окрашивается. Контрольные про-
бирки остаются практически бесцветными. 
Из микробюретки стандартным раствором сульфата аммония оттитро-
вать контрольную пробирку до получении окраски, одинаковой по интенсив-
ности с опытной пробиркой. 

---

63 
По количеству стандартного раствора (NН
4
)
2
SО
4
, пошедшего на титро-
вание контроля, определить количество остаточного азота, содержащегося 
в опыте. (1 мл стандартного раствора соответствует 0,05 мг азота). 
Расчет остаточного азота в ммоль/л аммиака проводят по формуле: 
X = А • 43,9 ммоль/л, где 
X – содержание остаточного азота в образце крови. 
А – мл сернокислого аммония, пошедшего на титрование, 
43,9 – коэффициент пересчета.
Данные оформить в виде протокола.