Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

Порядок выполнения работы: 
К 1 мл рабочего раствора, содержащего пара-нитрофенилфосфат, добавить 
2 капли сыворотки крови и инкубировать в течение 4 минут при температу-
ре 37°С. Определить интенсивность развившегося желтого окрашивания 
колориметрированием при фиолетовом светофильтре и толщине кюветы 3 
мм. Расчет активности: 
Еоп. ∙ 2764/4 = Е оп.∙ 691 ед/л/мин, где
Е оп. – оптическая плотность реакционной смеси,
4 – время инкубации в минутах,
2764 – фактор пересчета. 

---

75 
Данные оформить в виде протокола, сделать вывод. 
Диагностическое значение: В норме активность щелочной фосфатазы 
колеблется в пределах 100-120 ед/л/мин у взрослых и 120-300 ед/л/мин у де-
тей первых 3 лет жизни. 
Резкое увеличение активности имеет место при холестазе, при циррозе пе-
чени, механической желтухе, первичных и метастазирован-ных опухолях пече-
ни. Повышается активность ЩФ при заболеваниях, сопровождающихся по-
вреждением паренхимы печени: вирусных гепатитах, туберкулезе, лимфогра-
нулематозе. 
Вторая группа заболеваний, вызывающих повышение активности фермента 
- поражение костной ткани: рахит, распад костной ткани, остеосаркомы, а 
также при метастазах опухолей в костную ткань 
 
 
 
Работа 35. ОПРЕДЕЛЕНИЕ В МОЧЕ СВОБОДНЫХ И АЦЕТИЛИ-
РОВАННЫХ ФОРМ СУЛЬФАНИЛАМИДОВ 
Цель работы: научиться определять количество общего и свободного 
сульфаниламида в моче и с помощью этого анализа оценивать способность 
печени к биотрансформации лекарственных средств. 
Принцип метода основан на способности свободных (неконъюгированных) 
сульфаниламидных препаратов образовывать окрашенный комплекс с нитри-
том натрия, ацетатом натрия и резорцином. 
Порядок выполнения работы: 
В две пробирки налить по 1 мл исследуемой мочи, а в третью –1 мл дис-
тиллированной воды (контроль). Во все пробирки добавить по 1,5 мл дистил-
лированной воды и по 5 капель 10% соляной кислоты. 

---

76 
1-ю пробирку, в которой будет определяться, общее количество сульфани-
ламида, выделяемого с мочой, поставить на 15 минут в кипящую водяную 
баню для гидролиза ацетилированной формы. Пробирку охладить. Во все 
три пробирки добавить по 2 капли 0,5% нитрита натрия, перемешать и ос-
тавить на 10 минут. Затем во все пробирки долить по 1,5 мл насыщенного 
раствора ацетата натрия и по 5 капель 0,5% раствора резорцина. Содержи-
мое пробирок тщательно перемешать и оставить на 15 минут для развития 
окраски. На фотоэлектроколориметре (ФЭКе) измерить экстинкцию раство-
ров в 1-ой (Е, – общий сульфаниламид) и 2-ой (Е
2
– свободный сульфанила-
мид) пробирках против контроля (3-я пробирка) при синем светофильтре и 
рабочей толщине кювет 0,5 мм. 
Расчет содержания ацетилированной формы сульфаниламида: 
X – содержание ацетилированной формы сульфаниламидного препа-
рата, %, 
Е
1
– общий сульфаниламид,
Е
2
– свободный сульфаниламид.