Учебное пособие для самостоятельной подготовки к экзамену по микробиологии, вирусологии и иммунологии

126. Реакция связывания комплемента, методы постановки, механизм и использование ее в бактериологии
Реакция связывания комплемента основана на способности комплемента полностью или частично адсорбироваться на комплексе антиген+антитело. Адсорбция комплемента на комплексе антиген+антитело визуально не проявляется, т.е. видимого комплекса не образует. Для того, чтобы установить произошла адсорбция комплемента или он остался свободным, в реакцию вводится вторая система – индикаторная, гемолитическая. Она состоит из антигена (эритроцитов барана) и антител (гемолитическая сыворотка). Если комплемента в растворе нет, так как он адсорбировался на комплексе антиген+антитело в первой части реакции, гемолиза во второй части реакции не будет, эритроциты осядут на дно пробирки, реакция положительная. Если же комплемент остался в растворе, так как нет взаимодействия между антигеном и антителами в первой части реакции, то наступает гемолиз эритроцитов, образуется «лаковая кровь», реакция отрицательная.
РСК характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Она может быть применена для диагностики почти всех инфекционных заболеваний, как для обнаружения антигена, так и для определения антител. Сложность постановки реакции обусловлена количеством вводимых компонентов, необходимостью определять точные количественные соотношения.
1. Исследуемая или свежее взятая иммунная сыворотка перед опытом подвергается прогреванию при 56°С в течение 30 мин для инактивации, т.е. разрушения собственного комплемента. После инактивации сыворотку разводят 1:5.
2. Антиген готовят или из культур микробов или органов инфицированного или здорового животного. Антиген титруют и определяют то его количество, при котором отсутствует тормозящее на комплемент действие.
3. Комплемент титруют и определяют его рабочую дозу. Рабочая доза комплемента – это количество комплемента, увеличенное против титра на 25-30%. Это необходимо потому, что активность комплемента может быть несколько подавлена другими ингредиентами.
4. Гемолитическая сыворотка титруется, для постановки реакции используют сыворотку, усиленную против титра в 3-4 раза. Например, если титр сыворотки 1:1800, то в реакции применяют разведение 1:600.
5. Эритроциты барана получают из стерильно взятой дефибринированой крови, их отмывают, центрифугируя трижды с новыми порциями физиологического раствора, а потом готовят 3% взвесь.
Из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки готовят гемолитическую систему, смешивая равные объемы сыворотки и эритроцитов.
Только после подготовки всех компонентов ставят основной опят РСК.