Учебное пособие для самостоятельной подготовки к экзамену по микробиологии, вирусологии и иммунологии

131. Реакция нейтрализации токсина антитоксином, ее практическое применение.
Реакция нейтрализации токсина антитоксином основана на способности антител нейтрализовать действие экзотоксина бактерий. В качестве антигена используют белковые токсины бактерий (экзотоксины), сила которых выражается в специальных единицах.
Dlm – минимальная летальная доза – наименьшая доза токсина, способная убить животное определенного вида, веса в течение определенного времени.
Lm – наибольшее количество токсина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей антитоксина, введенное морской свинке весом 250 г не дает никакой видимой реакции
Lt – наименьшее количество токсина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей антитоксина, введенное морской свинке весом 250 г приводит к ее гибели в течение 4 дней
Lf – доза или единица флокуляции – это количество токсина, которое дает самую быструю реакцию флокуляции при смешивании токсина с одной из доз антитоксической сыворотки
В качестве антитела используется антитоксическая сыворотка, сила которой измеряется в антитоксических или международных единицах. За международную единицу антитоксина принимают то его наименьшее количество, которое нейтрализует стандартную дозу токсина.
Нейтрализация токсина антитоксином получается в строго определенных пропорциях и при одномоментном добавлении всего количества токсина к антитоксину. При дробном добавлении токсина смесь остается токсичной.
Реакцию нейтрализации токсина антитоксином применяют: 1) для обнаружения и титрования токсина с помощью диагностической антитоксической сыворотки; 2) для выявления и идентификации в сыворотке нейтрализующих антител с помощью стандартного диагностикума.
Реакцию нейтрализации можно поставить в двух вариантах: в организме и в пробирке. В первом случае токсинсодержащие экстракты из выделений, органов больного или продуктов смешивают со стандартными антитоксическими сыворотками и после 30-45 мин экспозиции при комнатной температуре смесь вводят чувствительному животному, чтобы убедиться, что она безвредна. Контрольному животному вводят смесь токсинсодержащих экстрактов и физиологического раствора. Сравнивают эффект в опыте и в контроле. Животные, оставшиеся в живых, при гибели в контроле, свидетельствуют о нейтрализации токсина, содержащегося в исследуемой пробе. Титруют токсин также по методу Эрлиха.
При постановке реакции в организме можно предварительно опытному животному ввести антитоксическую сыворотку, а потом ввести оттитрованную дозу токсина. Контрольному животному вводят только токсин и оно погибает, так как в организме нет антител.
Вариантом постановки реакции нейтрализации в организме является определение уровня антитоксического иммунитета путем постановки внутрикожных проб с токсином (пробы Шика, Дика и др.).
Нейтрализация токсина антитоксином может быть определена в чашках Петри методом преципитации в геле. Эта модификация используется для обнаружения токсигенности культур дифтерийных палочек, стафилококков и др. Токсигенность выявляют по линиям преципитации, которые появляются в агаре в результате взаимодействия токсина, образуемого исследуемой культурой и диффундирующего в агар и антитоксина, также диффундирующего в агар из места его нанесения.
Присутствие токсина, а также его силу можно определить пробирочным методом в реакции флоккуляции.