Ushbu nashr uchun munozaralar, statistika va muallif profillarini quyidagi manzilda ko'ring


Olingan turlararo duragaylarni PCR yordamida tahlil qilish


Download 0.96 Mb.
bet191/377
Sana09.01.2022
Hajmi0.96 Mb.
#264325
1   ...   187   188   189   190   191   192   193   194   ...   377
Bog'liq
Sahifa 1

Olingan turlararo duragaylarni PCR yordamida tahlil qilish . Gibrid sinov

Olingan turlararo patlıcan duragaylari yordamida ishlab chiqarilgan

ISSR (oraliq ketma-ketlik) yordamida PCR (polimeraza zanjiri reaktsiyasi)

takroriy - mikrosatellit joylari bilan yonma-yon joylashgan DNK fragmentlarining polimorfizmi

ketma-ketliklar) va IRAP (inter retrotransposon kuchaytirilgan polimorfizm - polimorfizm)

teskari terminal mintaqalari yonidagi DNK fragmentlari fizikasi

kami retrotransposon) primerlari.

Ota-ona chiziqlari va gibrid patlıcan o'simliklarining umumiy DNKsi ajratilgan

kichik yaproqlardan (Edvards va boshq. (1991) tasvirlangan) kichik o'zgarishlar bilan

yami: o'simlik namunalari ekstraktsiya tamponida to'g'ridan-to'g'ri trituratsiya qilingan, keyin

bu orqali quvurlar termostatda 20 daqiqa davomida 65 ° S haroratda inkübe qilindi. Kuchaytirish

DNK ekstraktsiyasi × ​​1 Taq buferini o'z ichiga olgan 25 mkL reaktsiya aralashmasida amalga oshirildi

(50% glitserol, 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.5%

Tween 20) tegishli to'plamdan, 1,5 mM MgCl 2 ; Har bir dNTP 0,2 mm; 20 soat

astar; 0,2 birlik Taq polimeraza (Fermentas, Litva) va 10 - 50 ng DNK. Ishlatilgan

Biz MyCycler termal velosipedini (Bio-Rad, AQSh) quyidagi rejimda ishladik: dastlabki

denatürasyon - 4 daqiqa (94 ° C da); denatürasyon - 94 ° C da 40 soniya; asosiy tavlash



193-bet

192

ariq - 40 soniya (harorat primerlarga qarab 50 dan 62 ° S gacha o'zgargan);

DNK sintezi - 72 ° C da 1 daqiqa, 30 tsikl; yakuniy cho'zish - 10 minut

72 ° S DNK bo'lmagan PCR aralashmasi nazorat sifatida xizmat qildi. Kuchaytiruvchi mahsulotlar

0,5% TBE tamponli (0,89 M Tris) 1,5% agarozli gelda elektroforez bilan ajratilgan

0,89 M borat kislotasi, 20 mM EDTA, pH = 7,5), etidiy bromid bilan bo'yalgan; qayta

natijalar CN-1500 gel hujjatlashtirish tizimi yordamida suratga olindi

Darkroom (VilberLourmat, Frantsiya). Kuchaytirish uchun sakkizta ISSR tubi ishlatilgan.

CJSC Syntol (Rossiya) da sintez qilingan choralar va 5 ta IRAP primerlari.


Download 0.96 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   187   188   189   190   191   192   193   194   ...   377




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling