Информационный материал по курсу вуза «Биотехнология»

Madaniy muhit va madaniy sharoitlar
Hujayralarni to'qima yoki organizmdan ajratib olib, ularni madaniyatga joylashtirgandan so'ng, madaniy muhit hujayralar in vivo jonli bo'lgan barcha tashqi sharoitlarni ta'minlashi kerak. Bu hujayralarning omon qolishini, ularning ko'payishini va farqlanishini ta'minlaydi. Hujayradan tashqari muhit hujayralarni ozuqaviy va gormonal omillar bilan ta'minlashi kerak, ya'ni hujayralarning o'sishi va omon qolishi uchun zarur bo'lgan barcha narsalarga ega bo'lishi kerak.
Hayvonlar va inson hujayralari madaniyati suyuq (o'sish muhiti), gazsimon (gazlar kontsentratsiyasi) va qattiq (substrat yuzasi) fazaga ma'lum talablarni qo'yadi. O'sish muhiti ma'lum bir tarkibdagi eritma bo'lib, unga noma'lum biologik kelib chiqadigan tarkibiy qismlar (plazma qo'shimchalari, qon zardoblari, to'qima ekstraktlari va boshqalar) qo'shiladi. Oziqlantiruvchi vositalarning asosi sho'r eritmalardir. Ushbu eritmalardagi mineral komponentlar shunday tanlanganki, eritma bufer funktsiyalarini bajaradi, madaniyat jarayonida muhitning doimiy kislota-ishqor muvozanatini saqlaydi. Muhitning pH doimiyligi etishtirish sharoitlarining asosiy talablaridan biridir.
Earl va Henks tuzli eritmalari odatda ozuqa moddalarini tayyorlash uchun ishlatiladi. Ushbu eritmalar, dulbekko va Vogta fosfatnosol buferi kabi, ekinlarni o'tkazish, hujayra liniyalarini ajratish va hujayra madaniyati bilan boshqa manipulyatsiyalarda hujayralarni sug'orish va yuvish uchun ham ishlatiladi. Kultivatsiyaning yana bir muhim sharti osmotik bosimdir. U 1 kg erituvchi (osmolyarlik) yoki 1 litr eritma (osmolyarlik) uchun osmotik faol zarralar (ionlar va ionlashtirilmagan molekulalar) mollari soni bilan belgilanadi. Suyultirilgan suvli eritmalarda bu qiymatlar yaqin. Eritmaning osmolyalligi (osmol/kg) \ u003d S m_i*x_i, bu erda m_i i-erigan moddaning konsentratsiyasi (mol/kg), x_i uning molekulasi dissotsiatsiya qilingan zarralar soni. Masalan, Erl eritmasi uchun osmolyallikning hisoblangan qiymati 310,6 mosmol/kg, haqiqiy 283 ga teng. Hujayra ko'payishi sodir bo'ladigan pH va osmolallik diapazonlari tor va hujayra turiga qarab o'zgaradi. Masalan, inson diploid fibroblastlarining klonal o'sishi uchun wi38 optimal pH \ u003d 7.30 + 0.15 va osmolyallik 285 + 40 mosmol/kg, tovuq embrionidan fibroblastlar uchun mos ravishda 7.12 + 0.18 va 300 + 20. Ko'pgina muhitlarda pH ni ushlab turish uchun bikarbonat buferi ishlatiladi: HCO₃ \ u003d CO₂ + OH, agar karbonat angidrid chiqarilsa, oh kontsentratsiyasi oshadi. Eritmalarda oz miqdordagi bikarbonat buferi (Henks eritmasi) bo'lishi mumkin, ular pH ni mahkam yopiq idishlarda ushlab turish uchun mo'ljallangan. Boshqalarida (Erl eritmasi) bikarbonat ko'proq, ular Co 2 qisman bosimi yuqori bo'lgan tizimlarda qo'llaniladi₂. Agar ekinlar₂pH ni saqlash qiyinroq bo'lgan CO 2 inkubatoridan tashqarida olib borilsa, muqobil bufer tizimlari talab qilinadi. Yaxshi bufer HEPES 4 - (2-oksietil)1-piperazinetansulfonik kislotadir. HEPES suvda oson eriydi, ikki valentli kationlarni bog'lamaydi, 0.05 mol konsentratsiyasiga qadar sitotoksik emas. 0.01 0.03 m konsentratsiyalarda qo'llaniladi.
Hayvon hujayralari madaniyatini boshqarish uchun standart muhit. Medium Иглаmem (minimal essential medium) va BME (basal medium, Eagle) ignalari. Mem tez-tez ishlatiladi. Uning tarkibida uglevodorod substrat vazifasini bajaradigan minerallar, aminokislotalar (13 muhim), 6 suvda eriydigan vitaminlar, xolin va Inositol mavjud. Mem faqat zardob bilan ishlatiladi, chunki unda biotin, B12 vitamini, temir ionlari va iz elementlari yo'q. Ning asosi Earl eritmasi.
Dulbekko muhiti DME yoki DMEM (igna muhitini ikki marta o'zgartirish). U har xil turdagi hujayralarni, shu jumladan transformatsiyalanmagan hujayralarni va gibridni etishtirishda ishlatiladi. Bu aylanma bo'lmagan muhit uchun asosdir. Aminokislotalarning ikki tomonlama konsentratsiyasi, glitsin, serin, piruvat, temirni o'z ichiga oladi. Ushbu vositadan foydalanganda 10% CO2 konsentratsiyali inkubator kerak bo'ladi.
Iskova muhiti IMDM - modifikatsiya dulbekko muhiti. Muhim aminokislotalar, biotin,_{b 12 vitamini,} natriy selenit qo'shildi. Chorshanba kuni HEPES joriy etildi va NaCl va NaHCO_{3 kontsentratsiyasi kamaydi}. Muhit sarumsiz bo'lib, odatda limfotsitlar va gematopoetik hujayralarni etishtirish uchun ishlatiladi.
Makkoy muhiti 5A va rpmi muhit seriyasi. Makkoy 5A muhiti 1958 yilda Uoker 256 karsinosarkomasi hujayralarining sarum, so'ngra boshqa birlamchi madaniyatlar va turli hujayra liniyalari ishtirokida klonal o'sishini ta'minlash uchun ishlab chiqilgan. Odatda Ivkat va Grace (RPMI) modifikatsiyasida ishlab chiqariladi va zardob ishtirokida oq qon hujayralarini etishtirish uchun mo'ljallangan, ko'pincha gibrid etishtirish uchun ham ishlatiladi.₂Kultivatsiya paytida atmosferada Co 2 kontsentratsiyasi 5% ni tashkil qiladi.
199-muhit 1950 yilda tovuq embrionidan yurak bo'laklarini etishtirish uchun ishlab chiqilgan. Atrof-muhit ozuqa moddalarining keng doirasi va ularning past konsentratsiyasi bilan ajralib turadi. U qo'shimchalarsiz, birlamchi hujayralar uchun qo'llab-quvvatlovchi sifatida, zardob bilan esa tez ko'payadigan hujayralar uchun o'sish vositasi sifatida ishlatiladi. Oddiy, o'ziga xos funktsiyalarni saqlaydigan hujayralar standart muhitda ko'paymaydi (agar o'zgartirilmasa). Hujayralarning optimal o'sishi uchun odatda xomilalik (embrion) sarumning 5-20% qo'shiladi.
Sarum kichik va katta molekulalarning juda murakkab aralashmasi bo'lib, hujayra o'sishini keltirib chiqarishi va inhibe qilishi mumkin. Sarumning asosiy funktsiyalariga quyidagilar kiradi: hujayralar o'sishini va ularning funktsiyalarini rag'batlantiradigan gormonal omillar bilan ta'minlash; hujayralarning biriktirilishi va tarqalishi omillari bilan ta'minlash; gormonlar, minerallar, lipidlar va boshqalarni tashiydigan transport oqsillari bilan ta'minlash.
O'sish omillarining aksariyati zardobda bir millilitr va undan past bo'lgan bir nechta nanagramlar konsentratsiyasida mavjud. Ushbu omillarning ba'zilari differentsiatsiyaning ma'lum bir bosqichidagi hujayralarga xosdir, boshqalarning ta'siri faqat bitta hujayra turi bilan cheklanmaydi. Xuddi shu turdagi hujayralarni turli xil o'sish omillari rag'batlantirishi mumkin. Masalan, fibroblastlar fibroblastlarning o'sish omiliga, epidermisning o'sish omiliga, trombotsitlar va somatomedinlar tomonidan sintez qilingan o'sish omiliga javoban ko'payadi. Bu moddalarning barchasi mitogenlardir (mitozni rag'batlantiradi). Deyarli barcha hujayra turlari uchun o'sishning yana bir muhim omili insulin gormonidir. Boshqa gormonlar orasida glyukokortikoidlar (gidrokortizon, deksametazon), steroidlar (estradiol, testosteron, progesteron) va qalqonsimon gormonlar (triiodotironin) eng ko'p ishlatiladi. Gormonlar hujayra turiga va ularning zichligiga qarab o'sishni rag'batlantiradi yoki inhibe qiladi. Masalan, glyukokortikoidlar o'sish omillariga sezgirligini o'zgartirib, hujayra proliferatsiyasiga ta'sir qiladi.
Past molekulyar og'irlikdagi omillarni (vitaminlar, aminokislotalar, lipidlar va boshqalar) o'tkazish uchun transport oqsillari kerak. Albumin bu rolda. Temirni tashish transferrinni ta'minlaydi va ko'pchilik madaniy hujayralar yuzasida bu protein uchun retseptorlar mavjud. Hujayralarning biriktirilishi va tarqalishi omillariga kollagen va fibronektin kiradi, xondronektin (xondrositlarning yopishishi) va laminin (epiteliya hujayralarining yopishishi) ko'proq ixtisoslashgan.
So'nggi yillarda hujayralarni ko'paytirish uchun sarumsiz muhitlar ishlab chiqilgan. Ko'pincha, bu muhitlar tor ixtisoslashgan, ya'ni.ma'lum bir hujayra turi uchun mo'ljallangan. Asosiy muhitga insulin, transferrin, gidrokortizon yoki uning analogi deksametazon va boshqalar qo'shiladi.Sarumsiz muhitlar ma'lum afzalliklarga ega: atrof-muhit tarkibining barqarorligi tufayli tajriba natijalarining takrorlanuvchanligini yaxshilash; madaniyatni viruslar, zamburug'lar, mikoplazma bilan yuqtirish xavfini kamaytirish; hujayra metabolizmi mahsulotlarini tozalashni osonlashtirish; biologik tadqiqotlar natijalariga qo'shimcha oqsillarning ta'sirini kamaytirish; sarum sitotoksikligining yo'qligi. Sarum ishtirokida hujayralarni etishtirish bir qator kamchiliklarni ham aniqlaydi: ko'pgina to'qimalar uchun sarum asl to'qimalarda aloqa qilgan fiziologik suyuqlik emas, shuning uchun, masalan, sarum fibroblastlarning o'sishiga olib keladi, ammo epidermal keratinotsitlarning o'sishiga to'sqinlik qiladi; sarum sitotoksik bo'lishi mumkin, chunki tarkibida poliaminlarga ta'sir qiluvchi poliamin oksidaza (spermin, spermidin)mavjud. tez ko'payadigan hujayralar sekretsiyasi mahsulotlari (embrion zardobida bunday fermentning nisbatan ko'p qismi mavjud); turli partiyalarning zardoblari tarkibidagi sezilarli o'zgaruvchanlik; sarumlarda etarli miqdordagi o'ziga xos o'sish omillari bo'lmasligi mumkin, bu ularni hujayra madaniyatlariga qo'shishni talab qiladi.
Ko'pgina sutemizuvchilar hujayralari ko'payishni boshlashdan va hujayra monoqatlamini hosil qilishdan oldin substratga yopishib, ustiga yoyilishi kerak. Shu munosabat bilan tegishli material haqida savol tug'iladi. Hozirgi vaqtda substrat sifatida bir nechta materiallar ishlatiladi. Shisha eng yaxshisidir pireks (aluminoborosilikat shisha), chunki natriy silikat shisha vositani ishqorlashi mumkin va uni iste'mol qilishdan oldin ozgina kislotada qaynatish kerak. Har foydalanish bilan bunday oynaning yaroqliligi pasayadi. Plastmassa-ko'pincha polistirol, polikarbonat, polivinilxlorid, teflon va boshqalar ishlatiladi. Metalllar-zanglamaydigan po'lat ham, titan ham mos keladi, chunki bu moddalar kimyoviy jihatdan inert va yuqori salbiy sirt zaryadiga ega. Hujayralar elektrostatik o'zaro ta'sirlar orqali biriktiriladi, shuning uchun madaniyat tomirlarining yuzasi namlangan va manfiy zaryadlangan bo'lishi kerak. Bunga oksidlovchi moddalar yoki fizik ta'sirlar (yuqori voltli zaryadsizlanish, ultrabinafsha nurlar, yuqori energiyali elektronlar bilan bombardimon qilish) bilan kimyoviy ishlov berish orqali erishish mumkin. Plastik idishlar ishlab chiqaradigan firmalar ushbu usullardan foydalanadilar. Ba'zi tadqiqotchilar, shunga qaramay, hujayralarni ekishdan oldin konsentrlangan sulfat kislota va kaliy bixromat (xrom aralashmasi) aralashmasi bilan ishlov berishni, so'ngra yaxshilab yuvishni afzal ko'rishadi. Ba'zida idishning yuzasi hujayralar biriktirilishini osonlashtiradigan modda bilan qoplanadi. Buning uchun ko'pincha kollagen va poliamin kislotalar ishlatiladi.
Hujayralarni etishtirishning ikkita asosiy tizimi mavjud.
1. Oqimsiz ekinlar-hujayralar muhitning belgilangan hajmiga kiritiladigan madaniyat turi. Hujayralar o'sishi bilan ozuqa moddalarini ishlatish va metabolitlarning to'planishi sodir bo'ladi, shuning uchun atrof-muhit vaqti-vaqti bilan o'zgarishi kerak, bu esa fiziologik differentsiatsiya deb ataladigan hujayra metabolizmining o'zgarishiga olib keladi. Vaqt o'tishi bilan atrof-muhitning tükenmesi natijasida hujayralar ko'payishi to'xtaydi.
Oqimsiz ekinlarning umrini ko'paytirishning bir necha yo'li mavjud:

• 
  intervalgacha (madaniyatning bir qismi teng miqdordagi yangi muhit bilan almashtiriladi);
  
• 
  doimiy (madaniyat hajmi doimiy past tezlikda ko'payadi va hujayralarning kichik qismlari vaqti-vaqti bilan olib tashlanadi);
  
• 
  perfuzion (yangi muhit madaniyatga doimiy ravishda kirib boradi va bir vaqtning o'zida ishlatilgan (hujayrasiz) muhitning teng hajmini olib tashlaydi).
  
• 
  Perfuziya butun muhit tizimdan chiqarilganda ochiq bo'lishi mumkin va olib tashlangan muhit uning pH darajasi tiklanadigan va shamollatish amalga oshiriladigan qo'shimcha idishdan o'tib, madaniyat idishiga qaytganda yopiq bo'lishi mumkin.
  

Oqimsiz ekinlarning barcha tizimlari chiqindilarning u yoki bu shaklda to'planishi va tashqi sharoitlarning nomuvofiqligi bilan ajralib turadi.
2. Oqim madaniyati ozuqa moddalari va metabolitlar kontsentratsiyasini va hujayralar sonini o'zgartirmasdan haqiqiy gomeostatik sharoitlarni ta'minlaydi. Gomeostaz muhitning madaniyatga doimiy kirib borishi va bir vaqtning o'zida hujayralar bilan teng miqdordagi muhitni olib tashlash bilan bog'liq. Bunday tizimlar suspenziya ekinlari va mikro tashuvchilarda bir qatlamli ekinlar uchun javob beradi.
Hayvon hujayralarini etishtirishda ikkita katta yo'nalish mavjud: bir qatlamli ekinlar va suspenziya ekinlari.
Hujayra hosildorligini oshirish nuqtai nazaridan suspenziya madaniyati afzalroqdir.
Bir qatlamli ekinlar ham bir qator afzalliklarga ega:
1. Yangi o'sadigan muhitni qo'shishdan oldin muhitni to'liq almashtirish va hujayralarni yuvish oson. Bu hujayra o'sishi ba'zi sharoitlarda, mahsulotning rivojlanishi esa boshqa sharoitlarda, masalan, hujayralarni sarum muhitidan sarumsiz muhitga o'tkazishda muhim ahamiyatga ega. Bundan tashqari, keraksiz komponentlarni butunlay olib tashlashingiz mumkin.
2. Ular yuqori hujayra zichligini ta'minlashga imkon beradi.
3. Ko'pgina hujayralarda, agar hujayralar substratga biriktirilgan bo'lsa, kerakli mahsulotning ifodasi samaraliroq bo'ladi.
4. Monoqatlamli kulturalar har qanday hujayra turi uchun ishlatilishi mumkin, bu esa tadqiqotning eng moslashuvchanligini ta'minlaydi.
5. Ba'zi hollarda, masalan, viruslarning tarqalishi uchun hujayralararo yaqin aloqalar talab qilinadi.
Bir qatlamli ekinlarning kamchiliklari:

• 
  katta maydon talablari;
  
• 
  kattalashtirish bilan qiymat va mehnat intensivligining oshishi;
  
• 
  namuna olish qiyinligi sababli etarli darajada samarali nazorat;
  
• 
  pH, kislorod kontsentratsiyasini aniqlash va nazorat qilishdagi qiyinchiliklar.
  

Shuni ta'kidlash kerakki, mikro tashuvchilardan foydalanish bu kamchiliklarni bartaraf etadi. Ushbu etishtirish usulining turli xil turlari mavjud. Uchta asosiy yo'nalishni ko'rib chiqing (rasm. 27):

1. Yassi flakonlarda (matraslarda) etishtirish.
2. Aylanadigan butilkalarda etishtirish, har bir vaqtda shisha yuzasining 1520% o'sadigan muhit bilan qoplangan va hujayralar navbatma-navbat muhitda yoki havoda bo'lganda.
3. Diametri 35 mm bo'lgan zich o'ralgan, siljimaydigan shisha boncuklar, plitalar to'plami va boshqalar bo'lgan mikro tashuvchilardagi ustunlarda etishtirish va o'sayotgan muhit ularni yuqoridan pastga qarab yuvib tashlaydi.
Deyarli har qanday inson hujayralari madaniyatga kiritilishi va ko'plab biologik tadqiqotlarda vosita va ob'ekt bo'lib xizmat qilishi mumkin. Madaniyatdagi hujayralarning eng muhim afzalliklaridan biri bu mikroskop yordamida ularni umr bo'yi kuzatish qobiliyatidir. Bundan tashqari, ba'zi holatlar uchun hujayra madaniyati ko'ngillilarning ishtirokini talab qiladigan klinik eksperimentlarning teng o'rnini bosishi mumkin. Muayyan masalani aniqlash uchun 1000 kishidan foydalanishni talab qiladigan tajribalar 100 ta ekinga teng statistik ishonch bilan joylashtirilishi mumkin.
Hujayra madaniyati tufayli tadqiqot va diagnostika imkoniyatlari deyarli cheksiz ravishda kengayadi, chunki nafaqat morfologik va biokimyoviy o'zgarishlarni, balki hujayralar xatti-harakatlaridagi o'zgarishlarni, ularning turli agentlarga, shu jumladan dori ta'siriga bo'lgan munosabatini baholash mumkin. Madaniyatdagi hujayralar turli xil biokimyoviy manipulyatsiyalar uchun osonlikcha mavjud bo'lganligi sababli, ular bilan ishlashda radioaktiv prekursorlar, zaharlar, gormonlar va boshqa vositalar ma'lum bir konsentratsiyada va ma'lum bir davrda kiritilishi mumkin. Tekshirilayotgan birikmaning jigar tomonidan metabollanishi, mushaklar tomonidan saqlanishi yoki buyraklar tomonidan chiqarilishi xavfi yo'qoladi. Hujayra madaniyatidan foydalanganda, odatda, tekshirilayotgan moddaning hujayralar bilan aloqa qilish vaqtini, ma'lum vaqt davomida uning konsentratsiyasini o'zgartirish oson. Bu o'rganilayotgan birikmalarning qo'shilish yoki metabolizm tezligining haqiqiy qiymatlarini olishga imkon beradi.
Hujayra chiziqlari dorilar, yuvish vositalari, kosmetika, insektitsidlar, konservantlar sifatida ishlatilishi mumkin bo'lgan turli xil moddalarning ta'sir qilish mexanizmini sinash va o'rganish uchun ishlatiladi. Hujayra madaniyatidan olingan natijalarni butun organizmga ekstrapolyatsiya qilish mumkin emas, ammo agar o'rganilayotgan modda madaniy hujayralarning bir nechta qatorlarida zararli ta'sirga ega bo'lsa, unda inson tanasiga salbiy ta'sir ko'rsatishi kutilishi kerak.
Bundan tashqari, agar in vivo jonli ravishda hujayralarga xos bo'lgan nuqson bir necha avlodlarda ko'paysa, demak bu nuqson irsiydir. Genetik muhandislik imkoniyatlari tufayli hujayra genotipining o'zgarishi haqiqatga aylandi. Biz tanadan mutant hujayralarni ajratib olishimiz, nuqsonli genlarni in vitro bilan almashtirishimiz, sog'lom genetik modifikatsiyalangan hujayralar qatorini olishimiz va ularni yana tanaga kiritishimiz mumkin.
Fibroblast madaniyati eng keng tarqalgan. Irsiy kasalliklarning patogenezi va diagnostikasini o'rganish uchun fibroblastlardan keng foydalanish nafaqat ularni etishtirish qulayligi, balki asosiy hujayra elementi fibroblastlar bo'lgan biriktiruvchi to'qima tana vaznining muhim qismini tashkil etishi bilan ham bog'liq. Bundan tashqari, fibroblastlar ko'plab organlarning stromasini tashkil qiladi, ularning morfogenezining muhim ishtirokchilari bo'lib, ixtisoslashgan hujayralarning differentsiatsiyasi va ishlashi uchun zarur bo'lgan mikro muhit sharoitlarini yaratadi. Fibroblastlarda monoamin oksidaza fermenti mavjud bo'lib, uning faoliyatidagi o'zgarishlar ba'zi asab va ruhiy kasalliklarga xosdir. Fibroblastlarda glyukokortikoid gormonlari, insulin va ba'zi neyrotransmitterlar uchun retseptorlar mavjud.
Grinberg 1978 yilda in vivo sharoitda madaniy fibroblastlardan olingan ma'lumotlarni ekstrapolyatsiya qilish imkoniyatini isbotladi.

• 
  Birinchidan, in vitro fibroblastlar tanadagi hujayralarga xos bo'lgan eng muhim xususiyatlarni, shuningdek donor organizmning ontogenetik va individual genotipik xususiyatlarini saqlab qoladi.
  
• 
  Ikkinchidan, tana hujayralarining xususiyatlarini to'liq aks ettiradigan boshqa turdagi hujayralar mavjud emas.
  
• 
  Uchinchidan, fibroblastlar madaniyatga kiritilganda yuzaga keladigan o'zgarishlar tegishli sharoitlarni yaratishda osongina nazorat qilinishi va minimallashtirilishi mumkin.
  

Yuqorida aytilganlarning barchasi, shuningdek, bir qator kasalliklar patogenezining uyali, biokimyoviy, molekulyar jihatlarini, shu jumladan asab tizimining irsiy nuqsonlari bilan bog'liq bo'lgan narsalarni o'rganish uchun fibroblastlardan foydalanishga yordam beradi.
Umurtqasiz hayvonlarning hujayra madaniyatiga bo'lgan qiziqish o'sish va metamorfozning xilma-xilligi va o'ziga xosligi bilan bog'liq bo'lib, ular hujayra differentsiatsiyasi va gen faolligini tartibga solishning asosiy jarayonlarini o'rganish ob'ekti bo'lishi mumkin. Boshqa tomondan, entomopatogen dorilarni olish usullarini ko'rib chiqayotganda, viruslar faqat tirik hasharotlar hujayralari yordamida ko'payishi mumkinligi ta'kidlandi, shuning uchun virusli dorilarni olish uchun zarur shart hasharotlar xostlarini oldindan ko'paytirish edi. Umurtqasiz hayvonlarning hujayra madaniyatlaridan foydalanish bu muammoni hal qilishga imkon beradi.
Hasharotlar hujayralarini etishtirishga birinchi urinishlar 20-asrning boshlarida qilingan. Biroq, olimlar orasida uzoq vaqt davomida madaniyatda umurtqasizlar hujayralarini etishtirish amaliy ahamiyatga ega emas degan fikr keng tarqalgan edi. Shu sababli hasharotlar hujayralari madaniyati bo'yicha tadqiqotlar etarlicha faol olib borilmadi. Muammoni intensiv o'rganish 60-yillarda, T. D. Greys evkalipt ipak qurti tuxumdon to'qimalaridan birinchi to'rtta tarjima qilingan chiziqni oldi. 1976 yilda hasharotlar hujayralarining 120 dan ortiq qayta tiklanadigan liniyalari mavjud edi va 1983 yilga kelib ularning soni 200 dan oshdi.
Umurtqasiz hayvonlarning hujayralari va to'qimalari madaniyatini olish uchun embrionlar, xayoliy disklar va hasharotlar organlari, homotsitlar, tuxumdonlar, yog ' tanalari ishlatiladi:

• 
  imaginal disklar (kattalar hasharotlar organlarining rudimentlari) in vitro differentsiatsiya jarayonlarini o'rganish uchun ishlatiladi;
  
• 
  qobig'i olib tashlangan embrionlar hasharotlar rivojlanishining dastlabki bosqichlarini o'rganish uchun ishlatiladi;
  
• 
  turli maqsadlar uchun alohida organlar, masalan, Diptera tuprik bezlari (pashshalar) - politenik xromosomalardagi puffing jarayonlarini o'rganish uchun (puf DNKni transkripsiyaga "qo'shganda" xromosomalarning shishishi, uning ayrim qismlari bo'shashganda va RNK sintez qiluvchi fermentlar RNK sintezini boshlaganda; hasharotlar eritilganda, puflar ma'lum bir ketma-ketlikda paydo bo'ladi)
  

Kultivatsiya qilingan hujayralarni olish uchun eng yaxshi manbalar hasharotlar lichinkalari va qo'g'irchoqlaridir.
Hasharotlar hujayralarining birlamchi madaniyatini olish usuli etarli darajada ishlab chiqilgan. U quyidagi bosqichlarni o'z ichiga oladi: hasharotlar yuzasini va o'stiriladigan to'qimalarni sterilizatsiya qilish; hujayralarning ajralishi; ularni o'sayotgan muhitga ko'chirish.
Birlamchi hujayra madaniyatlarining umri cheklangan. Ma'lum vaqtdan so'ng madaniyat qariydi, bu sitoplazmaning granulyatsiyasi, hujayralarning qisqarishi va yaxlitlanishi, hujayralar va qattiq substrat o'rtasidagi aloqalarning yo'qolishi bilan namoyon bo'ladi.
Virusologlarning sa'y-harakatlari barqaror hujayra liniyalarini olishga qaratilgan, ya'ni.cheksiz sun'iy ozuqa muhitida o'stirishga qodir hujayralar. Hozirgi vaqtda qishloq va o'rmon xo'jaligining lo'li kuya, karam metall qurti, paxta va tamaki qurti va boshqalar kabi muhim zararkunandalarining barqaror (qayta tiklanadigan) hujayra liniyalari olingan.
Hasharotlar hujayralari va to'qimalarini etishtirish uchun vositalar tarkibi jihatidan juda farq qiladi. Muhitni tuzishda gemolimfaning tarkibi to'g'risidagi ma'lumotlar qo'llaniladi. Muhitlar sutemizuvchilar hujayralari va to'qimalari muhitidan organik kislotalar, aminokislotalarning ko'payishi va osmotik bosimning oshishi bilan farq qiladi.
Biologik faol moddalarni olish uchun chiziqlari ishlatiladigan dengiz umurtqasizlari hujayralarini etishtirish usullarini o'rganish istiqbolli.
Hasharotlarning hujayra madaniyati biotexnologik ishlab chiqarish ob'ekti sifatida sutemizuvchilar hujayralariga nisbatan bir qator afzalliklarga ega: xona haroratida etishtirish imkoniyati, madaniy muhitning arzonligi, Co₂ inkubatoriga ehtiyoj yo'qligi, madaniyatda yuqori zichlik va boshqalar.

1.