Исследование выполнено при финансовой поддержке рффи в рамках научного проекта №18-015-00475-а
Download 1.12 Mb. Pdf ko'rish
|
elibrary 44165019 84118935
Материал и методы исследования. Образцы цельной крови (9 мл) здоровых доноров (n = 16) получали венопункцией в ге- паринизированные вакуумные пробирки (пробирки содержат 12–30 МЕ сухого гепарина на 1 мл крови). Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием (15 мин, 3000 об/мин), трижды отмывали в изотоническом растворе хлорида натрия. В опытах с исследованием агрегации эритроцитов, для ее стимулирования, добавляли к изотоническому раствору Ринг ёра относительно высокомолекулярный декстран-200 (10 % ХАЕС-старил, компа- ния Fresenius Kabi, Германия) в соотношении 7:3 по объему. Суспензию эритроцитов делили на несколько аликвот и клетки инкубировали в течение 30 мин при 37°С с каждым из перечис- ленных ниже соединений: С донором монооксида углерода (СO) – Tricarbonylchlo- ro(glycinato)ruthenium (II) (CORM-3, 50 M); Со стимулятором активности гемоксигеназы (ГО) биливер- дином гидрохлоридом (БГХ, 1,0 M). С блокатором Са2+ зависимых калиевых каналов – тетраэти- ламмонием (ТЕА, 250 M); Только в растворе Рингера без препаратов (контроль). В опыте и в контроле проводилось по 16 параллельных изме- рений. Все препараты и соединения получены от фирмы Sigma- Aldrich (США). Их растворяли в дистиллированной воде. Все эксперименты проводили в течение 4 ч после взятия крови. Исследование деформируемости и агрегации. Степень агре- гации эритроцитов (ПАЭ) определяли с помощью агрегометра Myrenne M1 (Германия). Кроме того, процесс агрегации и форму клеток контролировали с помощью прямой микроскопии. Для оценки деформируемости эритроцитов и их мембранной вязкоэластичности эритроцитов определяли индекс удлинения эритроцитов (ИУЭ) в проточной микрокамере, где создавали постоянное течение суспензии эритроцитов (Hct = 0,5 %). В микрокамеру подавали давление, которое создавало напряже- ние сдвига 0,98 Н/м 2 к и вытягивало клетки, прикрепленные ко дну камеры. Адгезия клеток происходила спонтанно. На основе измерения длины (L) и ширины (W) вытянутых потоком клеток рассчитывали индекс их удлинения (ИУЭ) как показатель де- формируемости эритроцитов: ИУЭ = L/W (отн. ед.). Статистическая обработка. Статистическую обработку ре- зультатов проводили с использованием программы Statistica 6.0. Проверку выборочного распределения проводили с помощью теста Шапиро-Уилка. Значимость различий определяли с помо- щью t-критерия Стьюдента. Гипотезу о взаимосвязи данных проверяли с помощью корреляции Спирмена. За уровень стати- стически значимых различий принимали изменения при p < 0.05 и p < 0.01. Данные в таблицах и тексте представлены как М ± m (среднее ± стандартная ошибка среднего). Download 1.12 Mb. Do'stlaringiz bilan baham: |
Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling
ma'muriyatiga murojaat qiling